דירעקט רט-קפּקר קיט
באַשרייַבונג
דירעקט רט-קפּקר קיט גיט סעפּעראַטלי פּאַקידזשד רט-קפּקר באַפער און הויך עפעקטיוו ענזייםגעמיש (Taq, M-MLV, RI), מאכן עס באַקוועם פֿאַר די קריייטינג פון צוריק-סוף קיץ און סיסטעםאַדזשאַסטמאַנט, ין פּשוט וועראַפאַקיישאַן.
ספּעסאַפאַקיישאַנז
500 ט, 50,000 ט
קיט קאַמפּאָונאַנץ
קיט אינהאַלט (20 μL אָפּרוף סיסטעם) | IM-05111-01 | IM-05112-01 |
500 ט | 50,000 ט | |
דירעקט ענזיים געמיש | 500 μל×1 | 50 מל×1 |
2× דירעקט רט-קפּקר באַפער | 1 מל×5 | 500 מל×1 |
לימעד | 1 | 1 |
אַפּערייטינג סטעפּס
איידער די רייידזשאַנט צוגרייטונג, אַלע די רייידזשאַנץ אין די קיט זאָל זיין טאָד אין צימער טעמפּעראַטור און דזשענטלי געמישט.
A: צוגרייטן of מוסטער און רעאַגענט
1. צוגרייטן צוגעגרייט רנאַ מוסטער (עס איז רעקאַמענדיד צו נוצן Foregene Total RNA Isolation Kit סעריע קיט צו עקסטראַקט און רייניקן רנאַ מוסטער) אָדער מוסטער קראַקינג פּראָדוקט (עס איז רעקאַמענדיד צו נוצן Foregene ליסיס סיסטעם), ספּעציפיש אָנפאַנגער (10 μם) און אנדערע באַטייַטיק קאָנסומאַבלעס, קיילע.
2. שטעלן די 2 × דירעקט RT-qPCR באַפער, RNase-Free ddH2O און 20 × ROX רעפערענץ פאַרב (אויב עס'ס דארף) אין די קעסטל מיט אייז, מאכן די צעשמעלצן געוויינטלעך, און געמישט דזשענטלי.
B: צוגרייטן of RT-qPCR סיסטעם
טיש 1 : צוגרייטן of RT-qPCR sסיסטעם
קאָמפּאָנענט | באַנד | לעצט קאַנסאַנטריישאַן |
2× דירעקט רט-קפּקר באַפער | 10 μל | 1× |
דירעקט ענזיים געמיש | 1μל | |
פֿאָרווערטס אָנפאַנגער (10 μם) | 0.8 μל | 50-900nM |
פאַרקערט אָנפאַנגער (10 μם) | 0.8 μל | 50-900nM |
זאָנד (4 μM) | 1μל | 200nM |
מוסטער (רנאַ אָדער ליסאַטע) | X μL | |
20×ROX רעפערענץ פאַרב | - | 1* |
רנאַסע-פרידה2אָ | (6.4-X) μל | |
גאַנץ באנד | 20μל |
C: שטעלן די RT-qPCR אָפּרוף פּראָגראַם
טיש 2 : RT-qPCR רעאַקטיon פּראָגראַם באַשטעטיקן (פֿאַר בייַשפּיל: צוויי-טרעפּל אופֿן)
טרעפּל | טעמפּעראַטור | צייַט | סייקאַלז | אינהאַלט | |
1 | 50℃ | 15 מין | 1* | 1 | פאַרקערט טראַנסקריפּציע |
2 | 95℃ | 1 מין | 1 | פאַר-דענאַטוראַטיאָן | |
3 | 95℃ | 10 סעק | 40-45 | דענאַטוראַטיאָן | |
60℃ | 30 סעק 2* | אַנאַנאַל / פאַרלענגערונג |
סטאָרידזש און פּאָליצע לעבן
-די קיט זאָל זיין סטאָרד בייַ -20± 5℃.די גילטיקייַט צייַט איז 12 חדשים.
- ויסמיידן ריפּיטיד פרירן-טאָ סייקאַלז (<5 סייקאַלז).