דירעקט רט-קפּקר קיט וו
קיט באַשרייַבונג:
◮דירעקט RT-qPCR קיט, ניצן Foreasy Reverse Transcriptase און Foreasy HS Taq DNA Polymerase דעוועלאָפּינג דורך Foregene, מיט יינציק אָפּרוף באַפער, מאכט דעם קיט מיט שטאַרק קעגנשטעל און קאַמפּאַטאַבילאַטי, און עס קענען גלייך פּרובירן אָפּרוף ניצן די Foregene ליסיס סיסטעם ווי מוסטער.דעם קיט קענען זיין אָנווענדלעך פֿאַר די אַנטוויקלונג פון נוקלעיק זויער דיטעקשאַן קיט פון COVID-19 און אנדערע פּאַטאַדזשעניק באַקטיריאַ.
באַשרייַבונג
דירעקט רט-קפּקר קיט גיט סעפּעראַטלי פּאַקידזשד רט-קפּקר באַפער, הויך עפעקטיוו פאָרעאַסי הס טאַק דנאַ פּאָלימעראַסעאון Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV),מאכן עס באַקוועם פֿאַר די קריייטינג פון צוריק-סוף קיץ און סיסטעם אַדזשאַסטמאַנט, אין פּשוט וועראַפאַקיישאַן.
דירעקט RT-qPCR קיט, ניצן Foreasy Reverse Transcriptase און Foreasy HS Taq DNA Polymerase דעוועלאָפּינג דורך Foregene, מיט יינציק אָפּרוף באַפער, מאכט דעם קיט מיט שטאַרק קעגנשטעל און קאַמפּאַטאַבילאַטי, און עס קענען גלייך פּרובירן אָפּרוף ניצן די Foregene ליסיס סיסטעם ווי מוסטער.דעם קיט קענען זיין אָנווענדלעך פֿאַר די אַנטוויקלונג פון נוקלעיק זויער דיטעקשאַן קיט פון COVID-19 און אנדערע פּאַטאַדזשעניק באַקטיריאַ.
דעם קיט קענען גלייך זיין דער קאָמפּאָנענט פון די IVD פּראָדוקט, לייכט און געשווינד.עס נאָר דאַרף גרינג וועראַפאַקיישאַן, אָן דעוועלאָפּינג ווידער.
ספּעסאַפאַקיישאַנז
500 ט, 50,000 ט
קיט קאַמפּאָונאַנץ
| קיט אינהאַלט (20 μL אָפּרוף סיסטעם) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 ט | 50,000 ט | |
| פרעזי רשטענדיק טראַנסקריפּציע (200 ו/μL) | 50 μל×1 | 1 מל×5 |
| פאָרעאַסי הס טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע (5 ו/μL) | 100 μל×1 | 1 מל×10 |
| 2× דירעקט רט-קפּקרבאַפער | 1 מל × 5 | 500 מל × 1 |
| לימעד | 1 | 1 |
אַפּערייטינג סטעפּס
א: צוגרייטן די מוסטער און רייידזשאַנט
1. צוגרייטן צוגעגרייט רנאַ מוסטער (עס איז רעקאַמענדיד צו נוצן Foregene Total RNA Isolation Kit סעריע קיט צו עקסטראַקט און רייניקן רנאַ מוסטער) אָדער מוסטער קראַקינג פּראָדוקט (עס איז רעקאַמענדיד צו נוצן Foregene ליסיס סיסטעם), ספּעציפיש אָנפאַנגער (10 μם) און אנדערע באַטייַטיק קאָנסומאַבלעס, קיילע.
2. שטעלן די 2 × דירעקט רט-קפּקר באַפער, רנאַסע-פריי דה2אָ און 20 × ראָקס רעפערענץ פאַרב (אויב עס איז דארף) אין די קעסטל מיט אייז, מאכן די צעשמעלצן געוויינטלעך, און געמישט דזשענטלי.
ב: צוגרייטן די RT-qPCR סיסטעם
באַקומען האַלב די באַנד פון אָפּרוף באַפער פון אָפּרוף סיסטעם (למשל, אויב די באַנד פון די סיסטעם איז 20 μ ל, עס דאַרף צו באַקומען 10 μ ל 2 × דירעקט RT-qPCR באַפער). פֿאַרקאָראַספּאַנדינג סומע פון ענזייםמיר פֿאָרשלאָגן אַזM-MLV：10-30 ו/20 μL אָפּרוף סיסטעם,טאַקדנאַ פּאָלימעראַסע:1-2 ו / 20 μ ל אָפּרוף סיסטעםדאָס איז אונדזער פאָרשלאָג, איר זאָל פּרובירן און סטרויערן עס), לייגן RNA מוסטער, ספּעציפיש אָנפאַנגער און פּראָבעס, און לייגן RNase-Free ddH2אָ צו 20 μל.די ספּעציפיש צוגרייטונג פון RT-qPCR אָפּרוף סיסטעם קענען זיין ריפערד צו די פאלגענדע טיש 1.
טיש 1: צוגרייטן די RT-qPCR סיסטעם
| קאָמפּאָנענט | באַנד | לעצט קאַנסאַנטריישאַן |
| 2× דירעקט רט-קפּקר באַפער | 10 μל | 1× |
| Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV) | 10-30 יו | |
| פאָרעאַסי הס טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע | 1-2 יו | |
| פֿאָרווערטס אָנפאַנגער (10 μם) | 0.8 μל | 50-900nM |
| פאַרקערט אָנפאַנגער (10 μם) | 0.8 μל | 50-900nM |
| זאָנד (4 μM) | 1 μל | 200nM |
| מוסטער (רנאַ אָדער ליסאַטע) | X μL | |
| 20× ROX רעפערענץ פאַרב | - | 1* |
| רנאַסע-פרידה2O | (6.4-X) μל | |
| גאַנץ באנד | 20 μל |
באַמערקונג: פֿאָרווערטס אָנפאַנגער און פאַרקערט אָנפאַנגער זענען ספּעציפיש פּרימערז פון ציל דזשין.די qPCR סיסטעם קען זיין אַדזשאַסטיד לויט צו פּראַקטיש יקספּערמענאַל און פּקר מאָדעלס.מיר רעקאָמענדירן 400nM פֿאַר די לעצט קאַנסאַנטריישאַן פון רובֿ פּרימערז.סטרויערן די באַנד פון ספּעציפיש פּרימערז און פּראָבעס לויט די צוגעגרייט קאַנסאַנטריישאַן און די רעקאַמענדיד לעצט קאַנסאַנטריישאַן, ביטע.
1 *: אויסקלייַבן די פּאַסיק לעצט קאַנסאַנטריישאַן פון ROX רעפערענץ פאַרב לויט פאַרשידענע קוואַנטיטאַטיווע פּקר ינסטראַמאַנץ.די אָפּטימאַל קאַנסאַנטריישאַן פון ROX רעפערענץ פאַרב פון פּראָסט קוואַנטיטאַטיווע פּקר ינסטראַמאַנץ איז געוויזן אין די פאלגענדע טיש:
| קוואַנטיטאַטיווע פּקר ינסטראַמאַנץ | לעצט קאַנסאַנטריישאַן פון ROX Reference Dye |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/סטעפּ איין,אאז"ו ו | 1 × (למשל, לייגן 1μl 20×ROX רעפערענץ פאַרב אין 20 μL אָפּרוף סיסטעם) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P און Mx4000, עטק. | 0.5 × (למשל, לייגן 0.5 μ ל 20 × ROX רעפערענץ פאַרב אין 20 μ ל אָפּרוף סיסטעם) |
| Roche PCR קיילע, Bio-Rad PCR קיילע, Eppendorf קוואַנטיטאַטיווע פּקר ינסטרומענט, עטק. | אָן ROX רעפערענץ פאַרב |
סטאָרידזש און פּאָליצע לעבן
די קיט זאָל זיין סטאָרד בייַ -20 ± 5 ℃.עס זאָל מיד זיין סטאָרד אין -20 ℃ טערמאַסטאַטיק פרידזשידער.די גילטיקייַט צייַט איז 2 יאָר אויב עס איז סטאָרד אין אַ פּאַסיק צושטאַנד.
