צעל דירעקט רט קפּר קיט-סיבר גרין איך דירעקט צעל ליסיס צעל גרייט איין-שריט qRT-PCR קיץ
דיסקריפּשאַנז
דער קיט ניצט אַ יינציק ליסיס באַפער סיסטעם וואָס קענען געשווינד מעלדונג רנאַ פון געבילדעטער צעל סאַמפּאַלז פֿאַר RT-qPCR ריאַקשאַנז, און דערמיט ילימאַנייטינג די צייט-קאַנסומינג און לאַבאָריאַס רנאַ רייניקונג פּראָצעס.די רנאַ מוסטער קענען זיין באקומען אין בלויז 7 מינוט.די 5×דירעקט RT מיקס און 2×דירעקט qPCR Mix-SYBR רייידזשאַנץ צוגעשטעלט דורך די קיט קענען געשווינד און יפעקטיוולי באַקומען פאַקטיש-צייט קוואַנטיטאַטיווע פּקר רעזולטאַטן.
5×דירעקט RT מיקס און 2×Direct qPCR Mix-SYBR האָבן שטאַרק ינכיבאַטער טאָלעראַנץ, און די ליסאַטע פון די סאַמפּאַלז קענען זיין געוויינט ווי אַ מוסטער פֿאַר RT-qPCR גלייַך.דעם קיט כּולל די יינציק רנאַ הויך-פינאַטי Foregene פאַרקערט טראַנסקריפּציע, און הייס ד-טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע, dNTPs, MgCl2, אָפּרוף באַפער, פּקר אָפּטימיזער און סטייבאַלייזער.
ספּעסאַפאַקיישאַנז
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
קיט קאַמפּאָונאַנץ
| טייל איך | באַפער קל |
| פאָרעגענע פּראָטעאַסע פּלוס וו | |
| באַפער סט | |
| טייל וו | דנאַ מעקער |
| 5× דירעקט רט מיקס | |
| 2× דירעקט קפּקר מיקס-סיבר | |
| 50× ROX רעפערענץ פאַרב | |
| RNase-Free ddH2O | |
| אינסטרוקציעס | |
פֿעיִקייטן & אַדוואַנטידזשיז
■פּשוט און עפעקטיוו: מיט Cell Direct RT טעכנאָלאָגיע, רנאַ סאַמפּאַלז קענען זיין באקומען אין בלויז 7 מינוט.
■ די מוסטער פאָדערונג איז קליין, אַזוי נידעריק ווי 10 סעלז קענען זיין טעסטעד.
■ הויך טרופּוט: עס קענען געשווינד דעטעקט רנאַ אין סעלז קאַלטשערד אין 384, 96, 24, 12, 6-געזונט פּלאַטעס.
■ דנאַ עראַסער קענען געשווינד באַזייַטיקן באפרייט גענאָמעס, זייער רעדוצירן די פּראַל אויף סאַבסאַקוואַנט יקספּערמענאַל רעזולטאַטן.
■ אָפּטימיזעד רט און קפּקר סיסטעם מאכט די צוויי-שריט רט-פּקר פאַרקערט טראַנסקריפּציע מער עפעקטיוו און פּקר מער ספּעציפיש, און מער קעגנשטעליק צו רט-קפּקר אָפּרוף ינכיבאַטערז.
קיט אַפּלאַקיישאַן
פאַרנעם פון אַפּלאַקיישאַן: געבילדעטער סעלז.
- רנאַ באפרייט דורך מוסטער ליסיס: בלויז אָנווענדלעך צו די RT-qPCR מוסטער פון דעם קיט.
- די קיט קענען ווערן גענוצט פֿאַר די פאלגענדע צוועקן: דזשין אויסדרוק אַנאַליסיס, וועראַפאַקיישאַן פון siRNA-מעדיאַטעד דזשין סילענסינג ווירקונג, מעדיצין זיפּונג, עטק.
דיאַגראַמע
סטאָרידזש און פּאָליצע לעבן
טייל איך פון דעם קיט זאָל זיין סטאָרד בייַ 4 ℃;טייל וו זאָל זיין סטאָרד בייַ -20 ℃.
Foregene Protease Plus II זאָל זיין סטאָרד אין 4℃, טאָן ניט פרירן ביי -20 ℃.
רעאַגענט 2×דירעקט qPCR Mix-SYBR זאָל זיין סטאָרד ביי -20℃אין דער פינצטער;אויב געוויינט אָפט, עס קענען אויך זיין סטאָרד אין 4℃ פֿאַר קורץ-טערמין סטאָרידזש (נוצן אין 10 טעג).
פאַקטיש צייט פּקר אָנפאַנגער פּלאַן פּרינסאַפּאַלז
פאָרויס אָנפאַנגער און פאַרקערט אָנפאַנגער
פֿאַר פאַקטיש צייט פּקר, אָנפאַנגער פּלאַן איז זייער וויכטיק.פּרימערז זענען שייַכות צו די ספּעציפֿישקייט און עפעקטיווקייַט פון פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן, און קענען זיין דיזיינד מיט די פאלגענדע פּרינסאַפּאַלז:
אָנפאַנגער לענג: 18-30 בפּ.
גק אינהאַלט: 40-60%.
טם ווערט: אָנפאַנגער פּלאַן ווייכווארג, אַזאַ ווי אָנפאַנגער 5, קענען געבן די טם ווערט פון די אָנפאַנגער.די טם וואַלועס פון די אַפּסטרים און דאַונסטרים פּרימערז זאָל זיין ווי נאָענט ווי מעגלעך.די טם כעזשבן פאָרמולע קענען אויך זיין געוויינט: טם = 4 °C (ג + C) + 2 °C (א + ה).ווען פּערפאָרמינג פּקר, אַ טעמפּעראַטור אונטער די אָנפאַנגער טם ווערט פון 5 °C איז בכלל אויסגעקליבן ווי די אַנילינג טעמפּעראַטור (די קאָראַספּאַנדינג פאַרגרעסערן אין די אַנילינג טעמפּעראַטור קענען פאַרגרעסערן די ספּעסיפיקייט פון די פּקר אָפּרוף).
פּרימערז און PCR פּראָדוקטן:
פּלאַן אָנפאַנגער פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן פּראָדוקט לענג איז פּרעפעראַבלי 100-150בפּ.
פּלאַן פּרימערז אין די צווייטיק סטראַקטשעראַל געגנט פון די מוסטער זאָל זיין אַוווידיד ווי פיל ווי מעגלעך.
ויסמיידן די פאָרמירונג פון 2 אָדער מער קאַמפּלאַמענטשי באַסעס צווישן די 3′ ענדס פון אַפּסטרים און דאַונסטרים פּרימערז.
אָנפאַנגער 3′ וואָקזאַל באַזע קענען ניט זיין פאָרשטעלן מיט 3 נאָך קאָנסעקוטיווע G אָדער C.
די פּרימערז זיך קענען נישט האָבן קאַמפּלאַמענטשי סטראַקטשערז, אַנדערש אַ האַירפּין סטרוקטור וועט זיין געשאפן, אַפעקטינג פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן.
ATCG זאָל זיין פונאנדערגעטיילט ווי יוואַנלי ווי מעגלעך אין די אָנפאַנגער סיקוואַנס, און די 3′ וואָקזאַל באַזע זאָל זיין אַוווידאַד ווי T.
אַפּפּענדיקס 1: צעל דירעקט רט-קפּקר קיט קאָמפּאָנענט העסאָפע פּאַק
1.צעל ליסיס לייזונג
|
| |||
| קיט קאַמפּאָונאַנץ (24 געזונט ליסיס סיסטעם / געזונט) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ט | 500 ט | ||
| טיילאיך | באַפער קל | 20 מל | 100 מל |
| פאָרעגענע פּראָטעאַסע פּלוס וו | 400 μל | קסנומקס מל × קסנומקס | |
| באַפער סט | קסנומקס מל × קסנומקס | 10 מל | |
| טיילוו | דנאַ מעקער | 400 μל | קסנומקס מל × קסנומקס |
2.רט מיקס
|
| |
| קיט קאַמפּאָונאַנץ (20 μל אָפּרוף סיסטעם) | DRT-01011-B1 |
| 200 ט | |
| 5× דירעקט רט מיקס | 800 μל |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 מל × 2 |
|
| ||
| קיט קאַמפּאָונאַנץ (20 μל אָפּרוף סיסטעם) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 ט | 1000 ט | |
| 2× דירעקט קפּקר מיקס-סיבר | קסנומקס מל × קסנומקס | 1.7 מל × 6 |
| 50× ROX רעפערענץ פאַרב | 40 μl | 200 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 מל | 10 מל |
אינסטרוקציעס מאַנואַל:
