(96-געזונט) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit - SYBR Green I
דיסקריפּשאַנז
די(96-געזונט) QuickEasyTM צעל דירעקט רט-קפּקר קיט—סיבר גרין יגיטאַ יינציק ליסיס באַפער סיסטעםto געשווינד מעלדונג רנאַפון געבילדעטער צעלסאַמפּאַלז פֿאַר RT-qPCR ריאַקשאַנז, ילימאַנייטינג די צייט-קאַנסומינג און לאַבאָריאַסרנאַ רייניקונג פּראָצעס, און עס נעמט בלויז 7 מינוט צו באַקומען די פארלאנגט רנאַ מוסטער.די5× דירעקט רט מיקסאון2× דירעקט קפּקר מיקס-סיברצוגעשטעלט אין די קעסטל קענען געשווינד אוןיפעקטיוולי באַקומען פאַקטיש-צייט קוואַנטיטאַטיוועPCR רעזולטאַטן.
5 × דירעקט רט מיקס און 2 × דירעקט קפּקר מיקס-סיבר האָבן שטאַרק ינכיבאַטער טאָלעראַנץ און קענען נוצן די ליסאַטע פון די מוסטער צו זיין טעסטעד ווי אַ מוסטער פֿאַר עפעקטיוו פאַרקערט טראַנסקריפּציע און ספּעציפיש אַמפּלאַפאַקיישאַן.דער רייידזשאַנט כּולל פאָרעגענע יינציק פאַרקערט טראַנסקריפּטאַסע מיט הויך קירבות פֿאַר רנאַ, ווי געזונט ווי הייס ד-טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע, dNTPs, MgCl2 , אָפּרוף באַפער, פּקר אָפּטימיזער און סטייבאַלייזער, און קענען זיין געוויינט אין קאַנדזשאַנגקשאַן מיט די ליסיס באַפער צו דעטעקט די מוסטער געשווינד, לייכט און אַקיעראַטלי, און עס האט די קעראַקטעריסטיקס פון הויך סענסיטיוויטי, שטאַרק ספּעסיפיסיטי און גוט פעסטקייַט.
די קיט איז אַימעד בייַ מיקראָ-סיסטעם ליסיס פון 96-געזונט געבילדעטער סעלז, און האט גוט יונאַפאָרמאַטי און קאָנסיסטענסי;די קיט קאַמפּאָונאַנץ צושטעלן 96 ליסיס ריאַקשאַנז, 96 פאַרקערט טראַנסקריפּציע ריאַקשאַנז און 96 × 2 qPCR ריאַקשאַנז, וואָס קענען טרעפן די 96-געזעלן טעלער פֿאַר איין מאָל נוצן, אַוווידיד די פאַרפּעסטיקונג געפֿירט דורך ריפּיטיד עפן, ייַז קאַלט און טאָינג פון רייידזשאַנץ און דערנידעריקונג פון רייידזשאַנט פאָרשטעלונג.
קיט קאַמפּאָונאַנץ
| קיט זאַץ ( 50 μל ליסיס סיסטעם / 20 μלRT אָפּרוף סיסטעם /20μל קפּקר אָפּרוף סיסטעם) | DRT-03011 | באַמערקונג | |
| 96T | |||
| טיילI | באַפערCL | 5 מל | צעלליסיס |
| פאָרעגענעפּראָטעאַסע פּלוס וו | 100 μL | ||
| באַפערST | 500 μL | ||
| טייל II | דנאַמעקער | 100 μL | |
| 5× דירעקט רט מיקס | 400 μL | RT | |
| 2× דירעקט קפּקר מיקס-SYBR | 1 עםL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX רעפערענץ פאַרב | 400µL | ||
| רנאַסע- פרייַddH2 O | 1.7 מל |
| |
| Mיערלעך | 1 שטיק | 1 סערווינג | |
*: די ליסיס רייידזשאַנט דנאַ מעקער איז אַרייַנגערעכנט אין טייל וו פון די קיט;צעל ליסיס, RT און qPCR קאַמפּאָונאַנץ קענען זיין פּערטשאַסט סעפּעראַטלי.
פֿעיִקייטן & אַדוואַנטידזשיז
■פּשוט און עפעקטיוו: מיט Cell Direct RT טעכנאָלאָגיע, רנאַ סאַמפּאַלז קענען זיין באקומען אין בלויז 7 מינוט.
■ די מוסטער פאָדערונג איז קליין, אַזוי נידעריק ווי 10 סעלז קענען זיין טעסטעד.
■ הויך טרופּוט: עס קענען געשווינד דעטעקט רנאַ אין סעלז קאַלטשערד אין 384, 96, 24, 12, 6-געזונט פּלאַטעס.
■ דנאַ עראַסער קענען געשווינד באַזייַטיקן באפרייט גענאָמעס, זייער רעדוצירן די פּראַל אויף סאַבסאַקוואַנט יקספּערמענאַל רעזולטאַטן.
■ אָפּטימיזעד רט און קפּקר סיסטעם מאכט די צוויי-שריט רט-פּקר פאַרקערט טראַנסקריפּציע מער עפעקטיוו און פּקר מער ספּעציפיש, און מער קעגנשטעליק צו רט-קפּקר אָפּרוף ינכיבאַטערז.
קיט אַפּלאַקיישאַן
פאַרנעם פון אַפּלאַקיישאַן: געבילדעטער סעלז.
- רנאַ באפרייט דורך מוסטער ליסיס: בלויז אָנווענדלעך צו די RT-qPCR מוסטער פון דעם קיט.
- די קיט קענען ווערן גענוצט פֿאַר די פאלגענדע צוועקן: דזשין אויסדרוק אַנאַליסיס, וועראַפאַקיישאַן פון siRNA-מעדיאַטעד דזשין סילענסינג ווירקונג, מעדיצין זיפּונג, עטק.
סטאָרידזש און פּאָליצע לעבן
טייל איך פון דעם קיט זאָל זיין סטאָרד אין 4℃;טייל וו זאָל זיין סטאָרד בייַ -20 ℃.
Foregene Protease Plus II זאָל זיין סטאָרד אין 4℃, טאָן ניט פרירן ביי -20 ℃.
רעאַגענט 2×דירעקט qPCR Mix-Taqman זאָל זיין סטאָרד ביי -20℃אין דער פינצטער;אויב געוויינט אָפט, עס קענען אויך זיין סטאָרד אין 4℃ פֿאַר קורץ-טערמין סטאָרידזש (נוצן אין 10 טעג).
פאַקטיש צייט פּקר אָנפאַנגער פּלאַן פּרינסאַפּאַלז
פאָרויס אָנפאַנגער און פאַרקערט אָנפאַנגער
פֿאַר פאַקטיש צייט פּקר, אָנפאַנגער פּלאַן איז זייער וויכטיק.פּרימערז זענען שייַכות צו די ספּעציפֿישקייט און עפעקטיווקייַט פון פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן, און קענען זיין דיזיינד מיט די פאלגענדע פּרינסאַפּאַלז:
- אָנפאַנגער לענג: 18-30 בפּ.
- גק אינהאַלט: 40-60%.
- טם ווערט: אָנפאַנגער פּלאַן ווייכווארג, אַזאַ ווי אָנפאַנגער 5, קענען געבן די טם ווערט פון די אָנפאַנגער.די טם וואַלועס פון די אַפּסטרים און דאַונסטרים פּרימערז זאָל זיין ווי נאָענט ווי מעגלעך.די טם כעזשבן פאָרמולע קענען אויך זיין געוויינט: טם = 4 °C (ג + C) + 2 °C (א + ה).ווען פּערפאָרמינג פּקר, אַ טעמפּעראַטור אונטער די אָנפאַנגער טם ווערט פון 5 °C איז בכלל אויסגעקליבן ווי די אַנילינג טעמפּעראַטור (די קאָראַספּאַנדינג פאַרגרעסערן אין די אַנילינג טעמפּעראַטור קענען פאַרגרעסערן די ספּעסיפיקייט פון די פּקר אָפּרוף).
- פּרימערז און PCR פּראָדוקטן:
- פּלאַן אָנפאַנגער פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן פּראָדוקט לענג איז פּרעפעראַבלי 100-150בפּ.
- פּלאַן פּרימערז אין די צווייטיק סטראַקטשעראַל געגנט פון די מוסטער זאָל זיין אַוווידיד ווי פיל ווי מעגלעך.
- ויסמיידן די פאָרמירונג פון 2 אָדער מער קאַמפּלאַמענטשי באַסעס צווישן די 3′ ענדס פון אַפּסטרים און דאַונסטרים פּרימערז.
- אָנפאַנגער 3′ וואָקזאַל באַזע קענען ניט זיין פאָרשטעלן מיט 3 נאָך קאָנסעקוטיווע G אָדער C.
- די פּרימערז זיך קענען נישט האָבן קאַמפּלאַמענטשי סטראַקטשערז, אַנדערש אַ האַירפּין סטרוקטור וועט זיין געשאפן, אַפעקטינג פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן.
- ATCG זאָל זיין פונאנדערגעטיילט ווי יוואַנלי ווי מעגלעך אין די אָנפאַנגער סיקוואַנס, און די 3′ וואָקזאַל באַזע זאָל זיין אַוווידאַד ווי T.
אַפּפּענדיקס1: סיעל דירעקטRT-qPCR קיט קאָמפּאָנענטה העסאָפע פּאַק
1.צעל ליסיס לייזונג
| צעל ליסיס לייזונג | |||
| קיט קאַמפּאָונאַנץ (24 געזונט ליסיס סיסטעם / געזונט) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ט | 500 ט | ||
| טיילאיך | באַפער קל | 20 מל | 100 מל |
| פאָרעגענע פּראָטעאַסע פּלוס וו | 400 μל | קסנומקס מל × קסנומקס | |
| באַפער סט | קסנומקס מל × קסנומקס | 10 מל | |
| טיילוו | דנאַ מעקער | 400 μל | קסנומקס מל × קסנומקס |
| רט מיקס | |
| קיט קאַמפּאָונאַנץ (20 μל אָפּרוף סיסטעם) | DRT-01011-B1 |
| 200 ט | |
| 5× דירעקט רט מיקס | 800 μל |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 מל × 2 |
| qPCR מיקס | ||
| קיט קאַמפּאָונאַנץ (20 μל אָפּרוף סיסטעם) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 ט | 1000 ט | |
| 2× דירעקט קפּקר מיקס-טאַקמאַן | קסנומקס מל × קסנומקס | 1.7 מל × 6 |
| 20× ROX רעפערענץ פאַרב | 40 μl | 200 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 מל | 10 מל |
אינסטרוקציעס מאַנואַל:
