1. נאָמען די פאַנגקשאַנז פון מער ווי 5 רנאַס?
אַריבערפירן רנאַ טרנאַ אַריבערפירן אַמינאָ זויער ריבאָסאָם רנאַ רנאַ ריבאָסאָם קאַנסטאַטוץ שליח רנאַ מרנאַ פּראָטעין סינטעז מוסטער העטעראָגענעאָוס יאָדער רנאַ הרנאַ פּריקערסער פון דערוואַקסן מרנאַ קליין יאָדער רנאַ סנרנאַ ינוואַלווד אין הרננאַ ספּלייינג קליין יאָדער ספּלייסינג קליין רנאַ סRNA / 7סל-רנאַ סיטאָפּלאַסמאַטיק רנאַ סקרנאַ / 7סל-רנאַ סיטאָפּלאַסמאַטיק רנאַ רעטיקולאַטיאָן און פּלאַזמאַ רעטיקולום קאָמפּאָנענט /micRNA רעגיאַלייץ דזשין אויסדרוק ריבאָזימע רנאַ ענזימאַטיקאַללי אַקטיוו רנאַ
2. וואָס איז דער הויפּט חילוק צווישן פּראָקאַריאָטיק און עוקאַריאָטיק פּראַמאָוטערז?
פּראָקאַריאָטיק TTGACA --- TATAAT------ האַסכאָלע מאַפּע-35 -10 עוקאַריאָטיק ענכאַנסער---GC ---CAAT----TATAA-5mGpp-Initiation Site-110 -70 -25
3. וואָס זענען די הויפּט אַספּעקץ פון קינסטלעך קאַנסטראַקשאַן פון נאַטירלעך פּלאַסמיידז?
נאַטירלעך פּלאַסמיידז אָפט האָבן חסרונות, אַזוי זיי זענען נישט פּאַסיק פֿאַר נוצן ווי קאַריערז פֿאַר גענעטיק ינזשעניעריע, און מוזן זיין מאַדאַפייד און קאַנסטראַקטאַד: אַ.לייג פּאַסיק סעלעקציע מאַרקער גענעס, אַזאַ ווי צוויי אָדער מער, וואָס זענען גרינג צו נוצן פֿאַר סעלעקציע, יוזשאַוואַלי אַנטיביאָטיק גענעס.ב.פאַרגרעסערן אָדער פאַרמינערן פּאַסיק ענזיים קאַטינג זייטלעך צו פאַסילאַטייט רעקאָמבינאַטיאָן.ג.פאַרקירצן די לענג, שנייַדן אַוועק ומנייטיק פראַגמאַנץ, פֿאַרבעסערן די ימפּאָרט עפעקטיווקייַט און פאַרגרעסערן די לאָודינג קאַפּאַציטעט.ד.טוישן די רעפּליקאַן, פון ענג צו פרייַ, פון ווייניקערע עקזעמפלארן צו מער קאפיעס.E.לייג ספּעציעל גענעטיק עלעמענטן לויט די ספּעציעל רעקווירעמענץ פון גענעטיק ינזשעניעריע
4. געבן אַ בייַשפּיל פון אַ מעטאָד פֿאַר דיפערענטשאַל זיפּונג פון געוועב-ספּעציפיש קדנאַ?
צוויי צעל פּאַפּיאַליישאַנז זענען צוגעגרייט, די ציל דזשין איז אויסגעדריקט אָדער העכסט אויסגעדריקט אין איינער פון די סעלז, און די ציל דזשין איז נישט אויסגעדריקט אָדער נידעריק אויסגעדריקט אין די אנדערע צעל, און דער ציל דזשין איז געפֿונען דורך כייברידיזיישאַן און פאַרגלייַך.פֿאַר בייַשפּיל, בעשאַס די פּאַסירונג און אַנטוויקלונג פון טומאָרס, אָנוווקס סעלז וועט פאָרשטעלן מרנאַ מיט פאַרשידענע אויסדרוק לעוועלס ווי נאָרמאַל סעלז.דעריבער, אָנוווקס-פֿאַרבונדענע גענעס קענען זיין סקרינד אויס דורך דיפערענטשאַל כייברידיזיישאַן.די ינדאַקשאַן אופֿן קענען אויך זיין געניצט צו ויסמעקן די גענעס וועמענס אויסדרוק איז ינדוסט.
5. דור און זיפּונג פון כייבראַדאָמאַ צעל שורות?
מילץ ב סעלז + מיעלאָמאַ סעלז, לייגן פּאַליעטאַלין גלייקאָל (PEG) צו העכערן צעל פוסיאָן, און די מילץ ב-מיעלאָמאַ פוסיאָן סעלז דערוואַקסן אין האַט מיטל (מיט היפּאָקסאַנטהינע, אַמינאָפּטערין, ט) פאָרזעצן צו יקספּאַנד שפּייַזן.די צעל פוסיאָן כּולל: מילץ-מילט פוסיאָן סעלז: ניט געקענט צו וואַקסן, מילץ סעלז קענען ניט זיין געבילדעטער אין וויטראָ.ביין-ביין פוסיאָן סעלז: קענען נישט נוצן היפּאָקסאַנטהינע, אָבער קענען סינטאַסייז פּיורינע דורך די רגע פּאַטוויי ניצן פאָלאַטע רעדוקטאַסע.אַמינאָפּטערין ינכיבאַץ פאָלאַטע רעדוקטאַסע און קען נישט וואַקסן.ביין-מילט פוסיאָן סעלז: קענען וואַקסן אין האַט, מילץ סעלז קענען נוצן היפּאָקסאַנטהינע, און ביין סעלז צושטעלן צעל אָפּטייל פונקציאָנירן.
6. וואָס איז דער פּרינציפּ און אופֿן פון דיטערמאַנינג די ערשטיק סטרוקטור פון דנאַ דורך די דידעאָקסי וואָקזאַל טערמאַניישאַן אופֿן (סאַנגער אופֿן)?
דער פּרינציפּ איז צו נוצן אַ נוקלעאָטידע קייט טערמינאַטאָר-2,,3,-דידעאָקסינוקלעאָטידע צו פאַרענדיקן די פאַרלענגערונג פון דנאַ.זינט עס פעלן די 3-אָה פארלאנגט פֿאַר די פאָרמירונג פון 3/5 / פאָספאָדיעסטער קייטן, אַמאָל ינקאָרפּערייטיד אין די דנאַ קייט, די דנאַ קייט קענען ניט זיין ווייַטער עקסטענדעד.לויט דעם פּרינציפּ פון באַזע פּערינג, ווען דנאַ פּאָלימעראַסע דאַרף דנמפּ צו אָנטייל נעמען אין די נאָרמאַלי עקסטענדעד דנאַ קייט, עס זענען צוויי פּאַסאַבילאַטיז, איינער איז צו אָנטייל נעמען אין דדנטפּ, וואָס רעזולטאטן אין די טערמאַניישאַן פון דעאָקסינוקלעאָטידע קייט פאַרלענגערונג;די אנדערע איז צו אָנטייל נעמען אין dNTP, אַזוי אַז די דנאַ קייט קענען נאָך פאָרזעצן צו פאַרברייטערן ביז דער ווייַטער דדנטפּ איז ינקאָרפּערייטיד.לויט דעם אופֿן, אַ גרופּע פון ​​דנאַ פראַגמאַנץ פון פאַרשידענע לענגקטס וואָס ענדיקן אין ddNTP קענען זיין באקומען.דער אופֿן איז צו טיילן אין פיר גרופּעס ריספּעקטיוולי ddAMP, ddGMP, ddCMP און ddTMP.נאָך דער אָפּרוף, פּאָליאַקרילאַמידע געל עלעקטראָפאָרעסיס קענען לייענען די דנאַ סיקוואַנס לויט די שווימערייַ באַנדס.
7. וואָס איז די positive רעגולירן ווירקונג פון אַקטיוואַטאָר פּראָטעין (קאַפּ) אויף טראַנסקריפּציע?
סיקליק אַדענילאַטע (קאַמפּ) רעסעפּטאָר פּראָטעין CRP (קאַמפּ רעסעפּטאָר פּראָטעין), דער קאָמפּלעקס געשאפן דורך די קאָמבינאַציע פון ​​​​קאַמפּ און קרפּ איז גערופֿן קאַפּ (קאַמפּאַקטיווייטיד פּראָטעין).ווען E. קאָלי איז דערוואַקסן אין אַ מיטל פעלנדיק גלוקאָוס, די סינטעז פון CAP ינקריסיז, און CAP האט די פונקציע פון ​​אַקטאַווייטינג פּראַמאָוטערז אַזאַ ווי לאַקטאָוס (לאַק).עטלעכע CRP-אָפענגיק פּראַמאָוטערז פעלן די טיפּיש -35 געגנט סיקוואַנס שטריך (TTGACA) וואָס פּראָסט פּראַמאָוטערז האָבן.דעריבער, עס איז שווער פֿאַר רנאַ פּאָלימעראַסע צו בינדן צו עס.די בייַזייַן פון קאַפּ (פונקציע): קענען באטייטיק פֿאַרבעסערן די ביינדינג קעסיידערדיק פון ענזיים און פּראָמאָטער.דער הויפּט ווייזט די פאלגענדע צוויי אַספּעקץ: ① קאַפּ העלפּס די ענזיים מאַלאַקיול צו אָריענטירן ריכטיק דורך טשאַנגינג די קאַנפאָרמיישאַן פון די פּראָמאָטער און ינטעראַקשאַן מיט די ענזיים, אַזוי צו פאַרבינדן די -10 געגנט און שפּילן די ראָלע פון ​​ריפּלייסינג די פונקציע פון ​​​​די -35 געגנט.②CAP קענען אויך ינכיבאַט די ביינדינג פון רנאַ פּאָלימעראַסע צו אנדערע זייטלעך אין דנאַ, דערמיט ינקריסינג די מאַשמאָעס פון ביינדינג צו זיין ספּעציפיש פּראָמאָטער.
8. וואָס סטעפּס זענען יוזשאַוואַלי אַרייַנגערעכנט אין אַ טיפּיש דנאַ רעקאָמבינאַטיאָן עקספּערימענט?
א.עקסטראַקט די ציל דזשין (אָדער עקסאָגענאָוס דזשין) פון די מענאַדעוו אָרגאַניזם, און ענזימאַטיקלי פאַרבינדן עס צו אן אנדער דנאַ מאַלאַקיול (קלאַנינג וועקטאָר) צו פאָרעם אַ נייַ רעקאָמבינאַנט דנאַ מאַלאַקיול.ב.אַריבערפירן די רעקאָמבינאַנט דנאַ מאַלאַקיול אין די באַקומער צעל און רעפּלאַקייט און ופהיטן עס אין די באַקומער צעל.דעם פּראָצעס איז גערופן טראַנספאָרמאַציע.ג.פאַרשטעלן און ידענטיפיצירן די באַקומער סעלז וואָס האָבן אַבזאָרבד די רעקאָמבינאַנט דנאַ.ד.מאַסע קולטור די סעלז מיט די רעקאָמבינאַנט דנאַ צו דעטעקט צי די פרעמד הילף דזשין איז אויסגעדריקט.
9. קאַנסטראַקשאַן פון דזשין ביבליאָטעק דריי מעטהאָדס פֿאַר זיפּונג פון רעקאָמבינאַנץ זענען געגעבן און דער פּראָצעס איז בעקיצער דיסקרייבד.
אַנטיביאָטיק קעגנשטעל זיפּונג, ינסערשאַנאַל ינאַקטיוויישאַן פון קעגנשטעל, בלוי-ווייַס אָרט זיפּונג אָדער פּקר זיפּונג, דיפערענטשאַל זיפּונג, דנאַ זאָנד רובֿ קלאָונינג וועקטאָרס פירן אַנטיביאָטיק קעגנשטעל גענעס (אַנטי-אַמפּיסיללין, טעטראַסיקלינע).ווען די פּלאַסמיד איז טראַנספערד אין Escherichia coli, די באַקטיריאַ וועט קריגן קעגנשטעל, און יענע אָן אַריבערפירן וועט נישט האָבן קעגנשטעל.אבער עס קען נישט ויסטיילן צי עס איז ריאָרגאַניזירט אָדער נישט.אין אַ וועקטאָר מיט צוויי קעגנשטעל גענעס, אויב אַ פרעמד דנאַ פראַגמענט איז ינסערטאַד אין איינער פון די גענעס און ז די דזשין צו זיין ינאַקטיווייטיד, צוויי טעלער קאָנטראָלס מיט פאַרשידענע דרוגס קענען זיין געוויינט צו פאַרשטעלן פֿאַר positive רעקאָמבינאַנץ.פֿאַר בייַשפּיל, די pUC פּלאַסמיד כּולל די LacZ דזשין (קאָדינג β-גאַלאַקטאָסידאַסע), וואָס קענען צעלייגנ די טשראָמאָגעניק סאַבסטרייט X-gal (5-בראָמאָ-4-טשלאָר-3-ינדאָל-β-ד-גאַלאַקטאָסידע) צו פּראָדוצירן בלוי, אַזוי די שפּאַנונג בלוי.ווען די פרעמד דנאַ איז ינסערטאַד, די LacZ דזשין קענען ניט זיין אויסגעדריקט, און די שפּאַנונג איז ווייַס, אַזוי ווי צו פאַרשטעלן די רעקאָמבינאַנט באַקטיריאַ.
10. דערקלערן די גרונט פּראָצעס פון באקומען טראַנסגעניק אַנימאַלס דורך עמבריאָניק סטעם סעלז?
עמבריאָניק סטעם סעלז (ES) זענען עמבריאָניק סעלז בעשאַס עמבריאָניק אַנטוויקלונג, וואָס קענען זיין אַרטאַפישאַלי געבילדעטער און פּראָוליפערייטיד און האָבן די פונקציע פון ​​דיפערענשייישאַן אין אנדערע טייפּס פון סעלז.קולטור פון ES סעלז: די ינער צעל מאַסע פון ​​די בלאַסטאָסיסט איז אפגעזונדערט און געבילדעטער.ווען ES איז קאַלטשערד אין אַ פידער-פריי שיכטע, עס וועט דיפערענשיייט אין פאַרשידן פאַנגקשאַנאַל סעלז אַזאַ ווי מוסקל סעלז און N סעלז.ווען קאַלטשערד אין אַ מיטל מיט פיבראָבלאַסץ, ES וועט האַלטן די דיפערענשייישאַן פונקציע.ES קענען זיין דזשאַנעטיקלי מאַניפּיאַלייטיד, און זייַן דיפערענשייישאַן פונקציע קענען זיין ינאַגרייטיד אָן אַפעקטינג זייַן דיפערענשייישאַן פונקציע, וואָס סאַלווז די פּראָבלעם פון טראַפ - ינאַגריישאַן.באַקענען עקסאָגענאָוס גענעס אין עמבריאָניק סטעם סעלז, דעמאָלט ימפּלאַנט אין די יוטעראַס פון שוואַנגער ווייַבלעך מיסע, אַנטוויקלען אין פּאַפּס און קרייַז צו קריגן האָמאָזיגאָוס מיסע.