רנאַ איז נישט יקסטראַקטיד אָדער רנאַ ייעלדס זענען נידעריק

עס זענען אָפט אַ פאַרשיידנקייַט פון סיבות וואָס ווירקן אָפּזוך עפעקטיווקייַט, אַזאַ ווי: געוועב מוסטער רנאַ אינהאַלט, אופֿן פון אָפּעראַציע, ילושאַן באַנד, עטק.

1. אייז וואַנע אָדער קריאָגעניק (4 °C) סענטריפוגאַטיאָן איז דורכגעקאָכט בעשאַס אָפּעראַציע.

רעקאָמענדאַציע: אַרבעטן אין צימער טעמפּעראַטור (15-25 ° C) איבער דער גאנצער פּראָצעס, טאָן ניט אייז וואַנע און סענטריפודזש ביי נידעריק טעמפּעראַטורעס.

2. ימפּראַפּער מוסטער פּרעזערוויישאַן אָדער יבעריק מוסטער סטאָרידזש צייַט.

רעקאָמענדאַציע: קראָם סאַמפּאַלז בייַ -80 °C אָדער פרירן אין פליסיק ניטראָגען און ויסמיידן ריפּיטיד פרירן-טאָ נוצן;פּרובירן צו נוצן פריש געוועב אָדער געבילדעטער סעלז פֿאַר רנאַ יקסטראַקשאַן.

3. ניט גענוגיק מוסטער ליסיס.

רעקאָמענדאַציע: ווען כאָומאַדזשאַנייזינג געוועב, ענשור אַז די געוועב איז גענוג כאָומאַדזשאַנייזד און אַז די געוועב סעלז זענען גענוג שפּאַלטן צו דערקלערן די מעלדונג פון רנאַ.

4. די עלוענט איז נישט מוסיף ריכטיק.

רעקאָמענדאַציע: באַשטעטיקן אַז RNase-Free ddH₂אָ איז מוסיף דראָפּווייז צו די מיטן פון די רייניקונג זייַל מעמבראַנע.

5. די ריכטיק באַנד פון אַבסאָלוט עטאַנאָל איז נישט צוגעגעבן צו Buffer RL2 אָדער Buffer RW2.

רעקאָמענדאַציע: גיי די ינסטראַקשאַנז, לייגן די ריכטיק באַנד פון אַבסאָלוט עטאַנאָל צו Buffer RL2 און Buffer RW2 און מישן געזונט איידער איר נוצן די קיט.

6. געוועב מוסטער דאָוסאַדזש איז נישט צונעמען.

רעקאָמענדאַציע: ניצן 10-20 מג פון געוועב אָדער (1-5) × 10⁶סעלז פּער 500 μל באַפער RL1, ווייַל יבעריק געוועב נוצן קענען רעזולטאַט אין רידוסט רנאַ יקסטראַקשאַן.

7. ימפּראַפּער ילושאַן באַנד אָדער דערענדיקט ילושאַן.

רעקאָמענדאַציע: די ילושאַן באַנד פון די רייניקונג זייַל איז 50-200 μל;אויב די ילושאַן ווירקונג איז נישט באַפרידיקנדיק, עס איז רעקאַמענדיד צו פאַרברייטערן די אָרט טעמפּעראַטור פּלייסמאַנט צייט נאָך אַדינג פּרעהעאַטעד RNase-Free ddH₂אָ, למשל פֿאַר 5-10 מינוט.

8.טהע רייניקונג זייַל האט עטאַנאָל רעזאַדו נאָך באַפער רוו2 וואַש.

רעקאָמענדאַציע: אויב עס איז עטאַנאָל רעזאַדו נאָך וואַשינג באַפער רוו 2, ליידיק רער סענטריפוגיישאַן פֿאַר 1 מינוט, די צייט פֿאַר די ליידיק רער סענטריפוגיישאַן אָפּעראַציע קענען זיין געוואקסן צו 2 מינוט, אָדער די רייניקונג זייַל קענען זיין שטעלן אין צימער טעמפּעראַטור פֿאַר 5 מינוט צו אַדאַקוואַטלי באַזייַטיקן די ריזידזשואַל עטאַנאָל.

פּיוראַפייד רנאַ איז דיגריידיד

די קוואַליטעט פון די פּיוראַפייד רנאַ איז שייַכות צו סיבות אַזאַ ווי די פּרעזערוויישאַן פון די מוסטער, רנאַסע קאַנטאַמאַניישאַן, און מאַניפּיאַליישאַן, עטק.

1. געוועב סאַמפּאַלז זענען נישט געהאלטן אין צייט.

רעקאָמענדאַציע: אויב געוועב סאַמפּאַלז אָדער סעלז זענען נישט געניצט אין אַ בייַצייַטיק שטייגער נאָך זאַמלונג, מיד קריאָפּערווע ביי -80 °C אָדער פליסיק ניטראָגען.צו עקסטראַקט רנאַ, נוצן אַ ניי גענומען געוועב אָדער צעל מוסטער ווען מעגלעך.

2. ריפּיטיד פרירן-טאָווינג פון געוועב סאַמפּאַלז.

רעקאָמענדאַציע: ווען סטאָרינג געוועב סאַמפּאַלז, עס איז בעסטער צו שנייַדן זיי אין קליין ברעקלעך פֿאַר פּרעזערוויישאַן, און באַזייַטיקן איינער פון די ברעקלעך ווען איר נוצן זיי צו ויסמיידן ריפּיטיד פרירן-טאָווינג פון די מוסטער און דערנידעריקונג פון רנאַ.

3. רנאַסע איז באַקענענ אָדער ניט ווערינג דיספּאָוזאַבאַל גלאַווז, מאַסקס, אאז"ו ו בעשאַס די אָפּעראַציע.

רעקאָמענדאַציע: רנאַ יקסטראַקשאַן יקספּעראַמאַנץ זענען בעסטער געטאן אין באַזונדער רנאַ מאַניפּיאַליישאַן רומז און די טיש איז קלירד איידער דער עקספּערימענט.

טראָגן דיספּאָוזאַבאַל גלאַווז און מאַסקס בעשאַס דער עקספּערימענט צו מינאַמייז רנאַ דערנידעריקונג געפֿירט דורך די הקדמה פון רנאַסע.

4. רעאַגענץ זענען קאַנטאַמאַנייטאַד מיט רנאַסע בעשאַס נוצן.

רעקאָמענדאַציע: פאַרבייַטן מיט אַ נייַע אַנימאַל גאַנץ רנאַ יסאָלאַטיאָן קיט פֿאַר פֿאַרבונדענע יקספּעראַמאַנץ.

5. די סענטריפודזש טובז, עצות, עטק געניצט אין רנאַ מאַניפּיאַליישאַן זענען קאַנטאַמאַנייטאַד מיט רנאַסע.

רעקאָמענדאַציע: באַשטעטיקן אַז די סענטריפודזש טובז, עצות, פּיפּעטטעס, עטק געניצט אין רנאַ יקסטראַקשאַן זענען אַלע רנאַסע-פֿרייַ.

פּיוראַפייד באקומען רנאַ אַפעקץ דאַונסטרים יקספּעראַמאַנץ

רנאַ פּיוראַפייד דורך די רייניקונג זייַל, אויב די זאַלץ ייאַנז, פּראָטעין צופרידן איז אויך גרויס, וועט ווירקן די דאַונסטרים עקספּערימענט, אַזאַ ווי: פאַרקערט טראַנסקריפּציע, נאָרדערן בלאָט עט על.

1. די elutioned רנאַ האט זאַלץ יאָן רעזאַדוז.

רעקאָמענדאַציע: באַשטעטיקן אַז די ריכטיק באַנד פון עטאַנאָל איז צוגעלייגט צו Buffer RW2 און דורכפירן 2 רייניקונג זייַל וואַשיז ביי די סענטריפוגאַל גיכקייַט וואָס איז אנגעוויזן פֿאַר אָפּעראַציע;אויב עס איז קיין זאַלץ יאָן רעזאַדו, לאָזן די רייניקונג זייַל צו Buffer RW2 פֿאַר 5 מינוט אין צימער טעמפּעראַטור און דורכפירן סענטריפוגיישאַן צו מאַקסאַמייז די באַזייַטיקונג פון זאַלץ קאַנטאַמאַניישאַן.

2. עטאַנאָל רעזאַדו אין ילוטיאָן רנאַ.

רעקאָמענדאַציע: באַשטעטיקן אַז נאָך באַפער RW2 וואַשינג, דורכפירן די ליידיק רער סענטריפוגיישאַן אָפּעראַציע מיט די סענטריפוגיישאַן גיכקייַט וואָס איז אנגעוויזן פֿאַר אָפּעראַציע, פאַרגרעסערן די צייט פון די ליידיק רער סענטריפוגיישאַן אָפּעראַציע צו 2 מינוט אויב עס איז נאָך עטאַנאָל רעזאַדו, אָדער לאָזן עס אין צימער טעמפּעראַטור פֿאַר 5 עם