Escherichia coli O157: H7 נוקלעיק זויער דיטעקשאַן קיט (PCR פלורעסאַנט פּראָבע מעטאַד)
קיט באַשרייַבונג:
Cat.No.FP102
עס איז געניצט פֿאַר גיך דיטעקשאַן און זיפּונג פון E. קאָלי אָ157: ה7 אין עסנוואַרג, קאָרמען, וואַסער סאַמפּאַלז און ינווייראַנמענאַל סאַמפּאַלז.
דיסקריפּשאַנז
עס איז געניצט פֿאַר גיך דיטעקשאַן און זיפּונג פון E. קאָלי אָ157: ה7 אין עסנוואַרג, קאָרמען, וואַסער סאַמפּאַלז און ינווייראַנמענאַל סאַמפּאַלז.
[טעסטינג פּרינציפּ]לויט דעם פּרינציפּ פון פלורעסאַנט פּקר טעכנאָלאָגיע, ספּעציפיש אָנפאַנגערס און טאַקמאַן פּראָבעס זענען דיזיינד פֿאַר די ספּעציפיש דזשין פון Escherichia coli O157: H7, און דיטעקטאַד דורך אַ פלורעסאַנט פּקר קיילע, אַזוי צו פאַרשטיין די דיטעקשאַן פון Escherichia coli O157: H7 קוואַליטאַטיווע דיטעקשאַן פון דנאַ.
קיט אינהאַלט
באַמערקונג: ROX קאַנאַל זאָנד איז נישט אַרייַנגערעכנט.
| Cבאאמטע | ספּעציפיקאַציע | Qואַנטיטי |
| בופער א | רער | 1 |
| Buffer B | רער | 1 |
| positive קאָנטראָל | רער | 1 |
| נעגאַטיוו קאָנטראָל | רער | 1 |
דערוואַרט באַניץ
עס איז געניצט פֿאַר גיך דיטעקשאַן און זיפּונג פון E. קאָלי אָ157: ה7 אין עסנוואַרג, קאָרמען, וואַסער סאַמפּאַלז און ינווייראַנמענאַל סאַמפּאַלז.
סטאָרידזש טנאָים און עקספּעריישאַן טאָג
קראָם בייַ -20 ℃ אין דער פינצטער און ויסמיידן ריפּיטיד ייַז קאַלט און טאָינג.
די גילטיקייַט צייַט איז 12חדשים, און די פּראָדוקציע טאָג איז געוויזן אויף די ויסווייניקסט פּאַקקאַגינג.
ינסטראַמאַנץ און קאָנסומאַבלעס
פלורעסאַנט קוואַנטיטאַטיווע פּקר קיילע, פּיפּעטטע ביקס און וואָס ריכטן עצות, וואָרטעקס שייקער, מיני סענטריפוגע.
באַניץ
1. מוסטער פּראַסעסינג
1.1 מוסטער טיפּ: דעם קיט איז פּאַסיק פֿאַר עסנוואַרג, קאָרמען, וואַסער סאַמפּאַלז און אנדערע סאַמפּאַלז סאַספּעקטיד צו זיין קאַנטאַמאַנייטאַד דורך Escherichia coli O157: H7.פֿאַר טיף-פּראַסעסט פלייש פּראָדוקטן, בעוורידזשיז און אנדערע סאַבסטאַנסיז מיט פּיגמאַנץ, זיי דאַרפֿן צו זיין רינסעד צו ויסמיידן אַפעקטינג די פלואָרעססענסע סיגנאַל זאַמלונג.
1.2 מוסטער פּראַסעסינג: אָפּשיקן צו "GB 4789.10-2016 פוד סאַפעטי נאַשאַנאַל סטאַנדאַרד פוד מיקראָביאָלאָגיקאַל דורכקוק פון Escherichia coli O157: H7 Test" פֿאַר מוסטער צוגרייטונג, ענריטשמענט קולטור און אפגעזונדערטקייט פון Escherichia coli O157: H7.
- Nעקסטראַקטיאָן פון וקלעיק זויער
נעמען 20 מל פון ענריטשמענט לייזונג אין אַ 1.5 מל סענטריפודזש רער, לייגן 200 μל פון מייקראָוביאַל ליסאַטע (נאָך קיט איז פארלאנגט), וואָרטעקס פֿאַר 30 סעקונדעס, סענטריפודזש בעקיצער, און שטעלן באַזונדער.
רימאַרקס: די יקסטראַקשאַן פון נוקלעיק זויער פון די ליסאַטע זאָל זיין געענדיקט אין 10 מינוט און קענען ניט זיין סטאָרד פֿאַר אַ לאַנג צייַט.
3. נוקלעיק זויער אַמפּלאַפאַקיישאַן
3.1 קער אויף די פלורעסאַנט קוואַנטיטאַטיווע פּקר קיילע פֿאַר נוצן.
באַפער א און באַפער ב פון די קיט, צעשמעלצן זיי ונ דורך און סענטריפודזש בעקיצער.לייג 18 μL Buffer A און 2 μL Buffer B צו יעדער פּקר אָפּרוף רער.דערנאָך לייגן 5 מל פון יעדער פון די נעגאַטיוו קאָנטראָל, יקסטראַקטיד נוקלעיק זויער און positive קאָנטראָל אין פּקר אָפּרוף טובז, קאַפּ די טובז און סענטריפודזש בעקיצער.
3.3 אַריבערפירן די פּקר אָפּרוף רער צו אַ פלורעסאַנט פּקר מאַשין, און נוצן די פאלגענדע פּראָוסידזשערז צו דורכפירן אַמפּלאַפאַקיישאַן יקספּעראַמאַנץ: סעלעקטירן 25 מל פֿאַר די אָפּרוף סיסטעם, קלייַבן פלורעסאַנס סיגנאַלז ביי 60 ° C פֿאַר יעדער ציקל, און סעלעקטירן FAM פֿאַר די דיטעקשאַן קאַנאַל.
| טרעפּל | פּראָגראַם | נומער פון סייקאַלז |
| 1 | 37℃ 5 מין | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3מין | 1 |
| 3 | 95°C 15s | 4 0 |
| 60 ℃ 30 ס (קלייַבן פלורעסאַנס) |
גוידעס פֿאַר אַנאַליסיס פון פּראָבלעמס
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
קיין רנאַ קענען זיין יקסטראַקטיד אָדער די טראָגן פון נוקלעיק זויער איז נידעריק
עס זענען יוזשאַוואַלי פילע סיבות וואָס ווירקן אָפּזוך עפעקטיווקייַט, אַזאַ ווי: מוסטער רנאַ אינהאַלט, אופֿן פון אָפּעראַציע, ילושאַן באַנד, אאז"ו ו.
אַנאַליסיס פון פּראָסט סיבות:
1.אייז וואַנע אָדער נידעריק-טעמפּעראַטור (4 ° C) סענטריפוגאַטיאָן בעשאַס אָפּעראַציע.
פאָרשלאָג: צימער טעמפּעראַטור (15-25 ° C) אָפּעראַציע, קיינמאָל ייַז וואַנע און נידעריק טעמפּעראַטור סענטריפודזש.
2. ימפּראַפּער מוסטער סטאָרידזש אָדער מוסטער סטאָרידזש פֿאַר צו לאַנג.
פאָרשלאָג: קראָם סאַמפּאַלז בייַ -80 ° C אָדער פרירן אין פליסיק ניטראָגען, און ויסמיידן ריפּיטיד פרירן-טאָ נוצן;פּרובירן צו נוצן פריש געזאמלט סאַמפּאַלז פֿאַר רנאַ יקסטראַקשאַן.
3.ינסופיקאַנט מוסטער ליסיס
רעקאָמענדאַציע: ביטע ענשור אַז די מוסטער און די אַרבעט לייזונג (לינעאַר אַקרילאַמידע) זענען ונ דורך געמישט און ינקובייטיד פֿאַר 10 מינוט אין צימער טעמפּעראַטור (15-25 ° C)
4.די עלוענט איז צוגעגעבן פאַלש
רעקאָמענדאַציע: מאַכן זיכער אַז RNase-Free ddH2O איז מוסיף צו די מיטן פון די מעמבראַנע פון די רייניקונג זייַל
5.ימפּראָפּער באַנד פון אַנהידראָוס עטאַנאָל אין באַפער ווירוו2
פאָרשלאָג: ביטע נאָכפאָלגן די ינסטראַקשאַנז, לייגן די ריכטיק באַנד פון אַנהידראָוס עטאַנאָל צו Buffer viRW2 און מישן זיי געזונט איידער איר נוצן די קיט.
6.ימפּראָפּער מוסטער באַניץ.
פאָרשלאָג: 200μל מוסטער פּער 500μל Buffer VirL.יבעריק מוסטער באַנד וועט רעזולטאַט אין רידוסט רנאַ יקסטראַקשאַן קורס.
7.ימפּראָפּער ילושאַן באַנד אָדער דערענדיקט ילושאַן.
פאָרשלאָג: די ילואַנט באַנד פון די רייניקונג זייַל איז 30-50μל;אויב די ילושאַן ווירקונג איז נישט באַפרידיקנדיק, עס איז רעקאַמענדיד צו לייגן פאַר-העאַטעד RNase-Free ddH2און פאַרברייטערן די צייט פּלייסינג אין צימער טעמפּעראַטור, אַזאַ ווי 5-10 מינוט
8.פּוריפיקאַטיאָן זייַל האט עטאַנאָל רעזאַדו נאָך רינסינג אין באַפער ווירוו2.
פאָרשלאָג: אויב עטאַנאָל נאָך רינסינג אין באַפער ווירו 2 און ליידיק רער סענטריפוגיישאַן פֿאַר 2 מינוט, די רייניקונג זייַל קענען זיין לינקס אין צימער טעמפּעראַטור פֿאַר 5 מינוט נאָך ליידיק רער סענטריפוגיישאַן צו גאָר באַזייַטיקן די רוען עטאַנאָל.
די דערנידעריקונג פון פּיוראַפייד רנאַ מאַלאַקיולז
די קוואַליטעט פון די פּיוראַפייד רנאַ איז שייַכות צו סיבות אַזאַ ווי מוסטער סטאָרידזש, רנאַסע קאַנטאַמאַניישאַן און אָפּעראַציע.
אַנאַליסיס פון פּראָסט סיבות:
1.די געזאמלט סאַמפּאַלז זענען נישט געראטעוועט אין צייט.
פאָרשלאָג: אויב דער מוסטער איז נישט געניצט אין צייט נאָך זאַמלונג, ביטע קראָם עס בייַ -80 ℃ אָדער פליסיק ניטראָגען מיד.פֿאַר די יקסטראַקשאַן פון רנאַ מאַלאַקיולז, פּרובירן צו נוצן פריש געזאמלט סאַמפּאַלז ווען מעגלעך.
2. קאַלעקטאַד סאַמפּאַלז זענען ייַז קאַלט און טאָינג ריפּיטידלי.
פאָרשלאָג: ויסמיידן ריפּיטיד ייַז קאַלט און טאָינג (ניט מער ווי אַמאָל) בעשאַס מוסטער זאַמלונג און סטאָרידזש, אַנדערש די טראָגן פון נוקלעיק זויער וועט פאַרמינערן.
3.RNase איז באַקענענ אין די אַפּערייטינג צימער אָדער קיין דיספּאָוזאַבאַל גלאַווז, מאַסקס, אאז"ו ו.
פאָרשלאָג: די עקסטראַקטיאָן פון רנאַ מאַלאַקיולז עקספּערימענט איז בעסטער געטאן אין אַ באַזונדער רנאַ אָפּעראַציע צימער, און די יקספּערמענאַל טיש איז קלינד איידער דער עקספּערימענט.טראָגן דיספּאָוזאַבאַל גלאַווז און מאַסקס בעשאַס דער עקספּערימענט צו ויסמיידן רנאַ דערנידעריקונג געפֿירט דורך רנאַסע הקדמה.
4.טהע רייידזשאַנט איז קאַנטאַמאַנייטאַד דורך רנאַסע בעשאַס די נוצן.
פאָרשלאָג: פאַרבייַטן מיט נייַ וויראַל רנאַ יסאָלאַטיאָן קיט פֿאַר פֿאַרבונדענע יקספּעראַמאַנץ.
5. די רנאַסע קאַנטאַמאַניישאַן פון די סענטריפודזש טובז, פּייפּעט עצות, אאז"ו ו. פאָרשלאָג: מאַכן זיכער אַז די סענטריפודזש טובז, פּייפּעט עצות און פּיפּעטטעס זענען אַלע רנאַסע-פֿרייַ.
די פּיוראַפייד רנאַ מאַלאַקיולז אַפעקטאַד דאַונסטרים יקספּעראַמאַנץ
די רנאַ מאַלאַקיולז פּיוראַפייד דורך די רייניקונג זייַל וועט ווירקן דאַונסטרים יקספּעראַמאַנץ אויב עס זענען צו פיל זאַלץ ייאַנז אָדער פּראָטעינס, אַזאַ ווי: פאַרקערט טראַנסקריפּציע, נאָרדערן בלאָט, אאז"ו ו.
1.עס זענען רוען זאַלץ ייאַנז אין די ילוטאַד רנאַ מאַלאַקיולז.
רעקאָמענדאַציע: מאַכן זיכער אַז די ריכטיק באַנד פון אַנהידראָוס עטאַנאָל איז צוגעלייגט צו Buffer viRW2, און וואַש די רייניקונג זייַל צוויי מאָל לויט די ריכטיק סענטריפוגיישאַן גיכקייַט אויף די אַפּערייטינג ינסטראַקשאַנז; אויב עס זענען נאָך זאַלץ ייאַנז רוען, איר קענען לייגן Buffer viRW2 צו די רייניקונג זייַל און לאָזן עס אין צימער טעמפּעראַטור פֿאַר 5 מינוט.דערנאָך דורכפירן סענטריפוגיישאַן צו באַזייַטיקן זאַלץ ייאַנז קאַנטאַמאַניישאַן צו די גרעסטע מאָס
2.עס זענען רוען עטאַנאָל אין די ילוטיד רנאַ מאַלאַקיולז
פאָרשלאָג: אַמאָל באַשטעטיקן אַז רייניקונג שפאלטן זענען רינסעד דורך Buffer viRW2, דורכפירן ליידיק רער סענטריפוגאַטיאָן לויט די סענטריפוגאַל גיכקייַט אויף די אַפּערייטינג ינסטראַקשאַנז.אויב עס איז נאָך עטאַנאָל רימיינדיד, עס קענען זיין לינקס פֿאַר 5 מינוט אין צימער טעמפּעראַטור נאָך אַ ליידיק רער סענטריפוגיישאַן צו באַזייַטיקן די רוען עטאַנאָל צו די גרעסטע מאָס.
אינסטרוקציעס מאַנואַל:
וויראַל רנאַ אפגעזונדערטקייט קיט ינסטרוקטיאָן מאַנואַל
