די רייניקונג זייַל איז קלאָגד

אין דעם קיט, אין די גענאָמיק דנאַ יקסטראַקשאַן אָפּעראַציע, די רייניקונג זייַל איז גלייַך אַדסאָרבעד אויף די מוסטער ענזימאַטיק ליסיס געמיש אָן סענטריפוגיישאַן שריט, און די רייניקונג זייַל קען זיין אפגעשטעלט רעכט צו דערענדיקט ענזימיזאַטיאָן און הויך וויסקאָסיטי פון די מוסטער.

די פאלגענדע מעגלעך סיבות זענען ווי גייט:

1. דערענדיקט ענזימאַטיק דיידזשעסטשאַן פון געוועב סאַמפּאַלז.

רעקאָמענדאַציע: די מוסטער פּראַסעסינג צייט פון Foregene Protease קענען זיין אַפּראָופּרייטלי עקסטענדעד אָדער די סופּערנאַטאַנט קענען זיין גענומען נאָך סענטריפוגיישאַן ביי 12,000 רפּם (~ 13,400 × ג) פֿאַר 5 מינוט.

2. יבעריק נוצן פון געוועב סאַמפּאַלז אָדער גרויס געוועבן.

רעקאָמענדאַציע: עס איז בעסטער נישט צו יקסיד 1 בוקקאַל ווישער אין דער מוסטער;אויב דער מוסטער איז צו גרויס, פאַרגרעסערן די דאָוסאַדזש פון Buffer ST1, Foregene Protease, Buffer ST2 אַקאָרדינגלי.

3. דער מוסטער וויסקאָסיטי איז אויך הויך.

רעקאָמענדאַציע: סאַמפּאַלז קענען זיין אַפּראָופּרייטלי דיילוטאַד מיט 10 מם פון Tris-HCl איידער גענאָמיק דנאַ יקסטראַקשאַן.

4. פראַגמענטן פון די בלוט קאָרט האָבן שוין זויגן.

רעקאָמענדאַציע: די טראַנסיענט סענטריפוגאַטיאָן צייט פון טרעפּ 6 פון בלוט אָרט (FTA קאַרד) גענאָמיק יקסטראַקשאַן קענען זיין אַפּראָופּרייטלי עקסטענדעד.

נידעריק טראָגן אָדער קיין דנאַ

עס זענען אָפט אַ פאַרשיידנקייַט פון סיבות וואָס ווירקן גענאָמיק דנאַ טראָגן, אַרייַנגערעכנט מוסטער אָנהייב, מוסטער סטאָרידזש טנאָים, מוסטער צוגרייטונג, מאַניפּיאַליישאַן, עטק.

גענאָמיק דנאַ קענען ניט זיין באקומען בעשאַס יקסטראַקשאַן

די מעגלעך סיבות זענען ווי גייט:

1. ימפּראַפּער פּרעזערוויישאַן פון סאַמפּאַלז אָדער סטאָרידזש פֿאַר צו לאַנג פירט צו גענאָמיק דנאַ דערנידעריקונג.

רעקאָמענדאַציע: מויל סוואַבז זאָל פּרעפעראַבלי זיין פריש סאַמפּאַלד, און עס איז נישט קעדייַיק צו נוצן אפגעהיט סוואַבז פֿאַר גענאָמיק דנאַ יקסטראַקשאַן אַפּעריישאַנז;בלוט אָרט סאַמפּאַלז זאָל ענשור אַז די קוואַליטעט איז קוואַלאַפייד און די סטאָרידזש צייט זאָל נישט זיין צו לאַנג.

2. צו קליין געוועב באַניץ קען רעזולטאַט אין קיין יקסטראַקשאַן פון די קאָראַספּאַנדינג גענאָמיק דנאַ.

רעקאָמענדאַציע: גיי די בוקקאַל ווישער מוסטערונג ינסטראַקשאַנז אין די אָפּעראַציע פירער, און ווישן ווי פילע מאל ווי מעגלעך אַזוי אַז גענוג סעלז קענען זיין אַטאַטשט צו די מויל ווישער פֿאַר גענאָמיק דנאַ יקסטראַקשאַן;פֿאַר יקסטראַקשאַן פון בלוט אָרט מוסטער, די קאַטינג געגנט פון בלוט אָרט קענען זיין אַפּראָופּרייטלי געוואקסן.

3. פאָרעגענע פּראָטעאַסע איז ימפּראַפּערלי אפגעהיט, ריזאַלטינג אין אַ פאַרקלענערן אין זייַן טעטיקייט אָדער ינאַקטיוויישאַן.

רעקאָמענדאַציע: באַשטעטיקן די סטאָרידזש טנאָים פון די Foregene Protease אָדער פאַרבייַטן עס מיט אַ נייַע Foregene Protease פֿאַר ענזימאַטיק אָפּרוף.

4. ימפּראַפּער פּרעזערוויישאַן פון די קיט אָדער סטאָרידזש צייַט איז אויך לאַנג, ריזאַלטינג אין די דורכפאַל פון עטלעכע קאַמפּאָונאַנץ אין די קיט.

רעקאָמענדאַציע: קויפן אַ נייַ בוקקאַל ווישער דנאַ אפגעזונדערטקייט קיט פֿאַר פֿאַרבונדענע פּראָוסידזשערז.

5. באַפער ווב טוט נישט לייגן אַבסאָלוט עטאַנאָל.

רעקאָמענדאַציע: באַשטעטיקן אַז באַפער ווב מוסיף די ריכטיק באַנד פון אַבסאָלוט עטאַנאָל.

6. די עלוענט איז נישט ריכטיק צוגעגעבן צו די סיליקאָנע פילם.

רעקאָמענדאַציע: לייג 65 °C פאַר-וואָרמד ילואַנט טראפנס צו די מיטן פון די סיליקאָנע מעמבראַנע און לאָזן אין צימער טעמפּעראַטור פֿאַר 5 מינוט צו פאַרגרעסערן די ילושאַן עפעקטיווקייַט.

נידעריק-טראָגן גענאָמיק דנאַ אפגעזונדערט

די פאלגענדע מעגלעך סיבות זענען ווי גייט:

1. ימפּראַפּער פּרעזערוויישאַן פון סאַמפּאַלז אָדער סטאָרידזש פֿאַר צו לאַנג פירט צו גענאָמיק דנאַ דערנידעריקונג.

רעקאָמענדאַציע: מויל סוואַבז זענען פּרעפעראַבלי פריש סאַמפּאַלד, און אפגעהיט סוואַבז זאָל ניט זיין געניצט פֿאַר גענאָמיק דנאַ יקסטראַקשאַן.

2. אויב די סומע פון ​​געוועב מוסטער איז אויך קליין, די יקסטראַקטיד גענאָמיק דנאַ אינהאַלט וועט זיין ווייניקער.

רעקאָמענדאַציע: גיי די מויל ווישער מוסטערונג ינסטראַקשאַנז אין די אָפּערייטינג פירער, ווישן ווי פילע מאָל ווי מעגלעך אַזוי אַז גענוג סעלז קענען זיין אַטאַטשט צו די מויל ווישער פֿאַר גענאָמיק דנאַ יקסטראַקשאַן.

3. פאָרעגענע פּראָטעאַסע איז ימפּראַפּערלי אפגעהיט, ריזאַלטינג אין אַ פאַרקלענערן אין זייַן טעטיקייט אָדער ינאַקטיוויישאַן.

רעקאָמענדאַציע: באַשטעטיקן די סטאָרידזש טנאָים פון די Foregene Protease אָדער פאַרבייַטן עס מיט אַ נייַע Foregene Protease פֿאַר ענזימאַטיק אָפּרוף.

4. עלוענט פּראָבלעמס.

רעקאָמענדאַציע: ניצן Buffer EB פֿאַר ילושאַן;אויב ניצן ddH₂אָדער אנדערע עלואַנץ, באַשטעטיקן אַז די ף פון די עלואַט איז צווישן 7.0-8.5.

5. די עלואַטע איז נישט ריכטיק צוגעגעבן דראָפּווייז.

רעקאָמענדאַציע: לייג עלואַנט טראפנס צו די מיטן פון די סיליקאָנע מעמבראַנע און לאָזן אין צימער טעמפּעראַטור פֿאַר 5 מינוט צו פאַרגרעסערן ילושאַן עפעקטיווקייַט.

6. די ילושאַן פליסיק אַקיומיאַלייץ צו קליין.

רעקאָמענדאַציע: ניצן eluent פֿאַר גענאָמיק דנאַ ילושאַן ווי פארלאנגט אין די ינסטראַקשאַנז, לפּחות ניט ווייניקער ווי 15 μל.

נידעריק ריינקייַט פון גענאָמיק דנאַ אפגעזונדערט

נידעריק גענאָמיק דנאַ ריינקייַט קענען פירן צו דורכפאַל אָדער אַנסאַטיספאַקטערי רעזולטאַטן פון דאַונסטרים יקספּעראַמאַנץ, אַזאַ ווי: ענזימעס קענען ניט זיין אָופּאַנד, פּקר קענען נישט באַקומען די דזשין פראַגמענט פון אינטערעס, עטק.

די מעגלעך סיבות זענען ווי גייט:

1. העטערפּראָטעין פאַרפּעסטיקונג, רנאַ פאַרפּעסטיקונג.

אַנאַליסיס: די רייניקונג זייַל איז נישט געוואשן ניצן Buffer PW;די רייניקונג זייַל פון וואַשינג פּוו בופער איז נישט געוואשן מיט די ריכטיק סענטריפוגאַל גיכקייַט.

רעקאָמענדאַציע: ענשור אַז עס איז קיין אָפּזאַץ אין די סופּערנאַטאַנט איידער אַדינג עטאַנאָל;זיין זיכער צו וואַשן די רייניקונג זייַל לויט די ינסטראַקשאַנז, און דעם שריט קענען ניט זיין איבערגעהיפּערט.

2. טומע יאָן פאַרפּעסטיקונג.

אַנאַליסיס: באַפער ווב וואַש רייניקונג זייַל איז איבערגעהיפּערט אָדער געוואשן בלויז אַמאָל, ריזאַלטינג אין ריזידזשואַל ייאַניק קאַנטאַמאַניישאַן.

רעקאָמענדאַציע: זייט זיכער צו וואַשן Buffer WB 2 מאל ווי דירעקטעד צו באַזייַטיקן ריזידזשואַל ייאַנז ווי פיל ווי מעגלעך.

3. רנאַ ענזיים קאַנטאַמאַניישאַן.

אַנאַליסיס: פרעמד רנאַסעס זענען צוגעגעבן צו באַפער;באַפער פּוו וואַשינג אָפּעראַציע איז געווען פאַלש, ריזאַלטינג אין רנאַסע רעזאַדוז, אַפעקטינג דאַונסטרים רנאַ יקספּערמענאַל אַפּעריישאַנז, אַזאַ ווי אין וויטראָ טראַנסקריפּציע.

רעקאָמענדאַציע: פאָרעגענע סעריע נוקלעיק זויער אפגעזונדערטקייט קיץ קענען באַזייַטיקן רנאַ אָן נאָך אַדישאַן פון רנאַסע, אַזוי בוקקאַל סוואַב / פטאַ קאַרד דנאַ אפגעזונדערטקייט קיט דאַרף נישט לייגן רנאַסע;זיין זיכער צו נאָכפאָלגן די ינסטראַקשאַנז פֿאַר באַפער פּוו וואַשינג רייניקונג זייַל, און דעם שריט קענען ניט זיין איבערגעהיפּערט.

4. עטאַנאָל רעזאַדו.

אַנאַליסיס: באַפער ווב האט נישט דורכפירן ליידיק רער סענטריפוגיישאַן נאָך וואַשינג די רייניקונג זייַל.

רעקאָמענדאַציע: דורכפירן די ריכטיק ליידיק רער סענטריפוגאַטיאָן אָפּעראַציע לויט די ינסטראַקשאַנז.

5. אנדערע טומאה פאַרפּעסטיקונג.

אַנאַליסיס: געראטעוועט סאַמפּאַלז אָדער ספּעציעל סאַמפּאַלז זענען נישט פּרעטרעאַטעד.

רעקאָממענדאַטיאָן: ונ דורך פאַרהיטן די מוסטער ווי געלערנט.