אָנפאַנגער פּלאַן יקער (99% פּראָבלעמס קענען זיין סאַלווד)
1. אָנפאַנגער לענג: די לערנבוך ריקווייערז 15-30 בפּ, יוזשאַוואַלי וועגן 20 בפּ.די פאַקטיש צושטאַנד איז בעסער צו זיין 18-24 בפּ צו ענשור די ספּעציפֿישקייט, אָבער די מער די בעסער, צו לאַנג אָנפאַנגער וועט אויך רעדוצירן די ספּעסיפיקאַטי און רעדוצירן די טראָגן.
2. אָנפאַנגער אַמפּלאַפאַקיישאַן שפּאַן: 200-500 בפּ איז צונעמען, און די פראַגמענט קענען זיין יקספּאַנדיד צו 10 קב אונטער ספּעציפיש טנאָים.
3. אָנפאַנגער באַזע: דער אינהאַלט פון ג + C זאָל זיין 40-60%, צו קליין ג + C אַמפּלאַפאַקיישאַן ווירקונג איז נישט גוט, צו פיל ג + C איז גרינג צו דערשייַנען ניט-ספּעציפיש באַנדס.אַטגק איז בעסטער פונאנדערגעטיילט ראַנדאַמלי, אַוווידינג קלאַסטערז פון מער ווי 5 פּורינע אָדער פּירימידינע נוקלעאָטידעס.מולטי-גק פֿאַר די 5′ סוף און ינטערמידייט סיקוואַנסיז צו פאַרגרעסערן פעסטקייַט, ויסמיידן רייַך GC אין די 3′ סוף, קיין GC פֿאַר די לעצטע 3 באַסעס, אָדער קיין GC פֿאַר 3 פון די לעצטע 5 באַסעס.
4. ויסמיידן צווייטיק סטרוקטור אין אָנפאַנגער, און ויסמיידן קאַמפּלאַמענטיישאַן צווישן צוויי אָנפאַנגער, ספּעציעל קאַמפּלאַמענטיישאַן אין די 3 'סוף, אַנדערש אָנפאַנגער דימער וועט זיין געשאפן און ניט-ספּעציפיש אַמפּלאַפייד באַנדס וועט זיין דזשענערייטאַד.
5. די באַסעס אין די 3 'סוף פון אָנפאַנגער, ספּעציעל די לעצטע און פּענאַלטאַמאַט באַסעס, זאָל זיין שטרענג פּערד צו ויסמיידן פּקר דורכפאַל רעכט צו אַנפּערד וואָקזאַל באַסעס.
6. פּרימערז האָבן אָדער קענען זיין מוסיף מיט צונעמען קלעאַוואַגע זייטלעך, און די אַמפּלאַפייד ציל סיקוואַנס זאָל פּרעפעראַבלי האָבן צונעמען קלעאַוואַגע זייטלעך, וואָס איז זייער וווילטויק פֿאַר קלעאַוואַגע אַנאַליסיס אָדער מאָלעקולאַר קלאָונינג.
7. ספּעסיפיקאַטי פון פּרימערז: אָנפאַנגער זאָל האָבן קיין קלאָר ווי דער טאָג כאָומאַלאַדזשי מיט אנדערע סיקוואַנסיז אין די נוקלעיק זויער סיקוואַנס דאַטאַבייס.
8. לערן צו נוצן ווייכווארג: PP5, Oligo6, DNAstar, Vector NTI, primer3 (דעם אָנליין פּלאַן אַרבעט בעסטער).
די אויבן אינהאַלט קענען סאָלווע בייַ מינדסטער 99% פון אָנפאַנגער פּלאַן פּראָבלעמס.
קאָנטראָלירן די דעטאַילס פון אָנפאַנגער פּלאַן
1. אָנפאַנגער לענג
אַלגעמיינע אָנפאַנגער לענג איז 18-30 באַסעס.אין אַלגעמיין, די מערסט וויכטיק פאַקטאָר דיטערמאַנינג די אַנילינג טעמפּעראַטור פון די אָנפאַנגער איז די לענג פון די אָנפאַנגער.די אַנילינג טעמפּעראַטור פון אָנפאַנגער איז בכלל אויסגעקליבן (טם ווערט -5 ℃), און עטלעכע גלייַך נוצן טם ווערט.די פאלגענדע פאָרמולאַס קענען זיין געניצט צו רעכענען די אַנילינג טעמפּעראַטור פון אָנפאַנגער.
ווען די לענג פון אָנפאַנגער איז ווייניקער ווי 20 בפּ: [4(G+C)+2(A+T)]-5℃
ווען די לענג פון אָנפאַנגער איז גרעסער ווי 20 בפּ: 62.3 ℃ + 0.41 ℃ (% גק) -500 / לענג - 5 ℃
אין אַדישאַן, פילע ווייכווארג קענען אויך זיין געניצט צו רעכענען די אַנילינג טעמפּעראַטור, די כעזשבן פּרינציפּ וועט זיין אַנדערש, אַזוי מאל די קאַלקיאַלייטיד ווערט קען האָבן אַ קליין ריס.צו אַפּטאַמייז פּקר ריאַקשאַנז, די שאָרטיסט פּרימערז וואָס ינשור אַנילינג טעמפּעראַטורעס פון נישט ווייניקער ווי 54 ℃ זענען געניצט פֿאַר דער בעסטער עפעקטיווקייַט און ספּעסיפיקאַטי.
קוילעלדיק, אָנפאַנגער ספּעסיפיקאַטי ינקריסיז מיט אַ פאַקטאָר פון פיר פֿאַר יעדער נאָך נוקלעאָטידע, אַזוי אַז די מינימום אָנפאַנגער לענג פֿאַר רובֿ אַפּלאַקיישאַנז איז 18 נוקלעאָטידעס.דער אויבערשטער שיעור פון אָנפאַנגער לענג איז נישט זייער וויכטיק, דער הויפּט שייַכות צו אָפּרוף עפעקטיווקייַט.ווייַל פון ענטראָפּי, די מער די אָנפאַנגער, די נידעריקער דער קורס אין וואָס עס אַניאַלז צו בינדן צו די ציל דנאַ צו פאָרעם אַ סטאַביל טאָפּל-סטראַנדיד מוסטער פֿאַר דנאַ פּאָלימעראַסע צו בינדן.
ווען ניצן ווייכווארג צו פּלאַן אָנפאַנגער, די לענג פון אָנפאַנגער קענען זיין באשלאסן דורך TM ווערט אין קער, ספּעציעל פֿאַר קוואַנטיטאַטיווע פּרימערז פון פלואָרעססענסע, TM = 60 ℃ אָדער אַזוי זאָל זיין קאַנטראָולד.
2.גק צופרידן
אין אַלגעמיין, די אינהאַלט פון G + C אין אָנפאַנגער סיקוואַנסיז איז 40% ~ 60%, און GC אינהאַלט און טם ווערט פון אַ פּאָר פון אָנפאַנגער זאָל זיין קאָואָרדאַנייטיד.אויב דער אָנפאַנגער האט אַ ערנסט GC אָדער AT טענדענץ, אַ צונעמען סומע פון A, T אָדער G און C עק קענען זיין מוסיף צו די 5 'סוף פון די אָנפאַנגער.
3. אַנילינג טעמפּעראַטור
די אַנילינג טעמפּעראַטור זאָל זיין 5 ℃ נידעריקער ווי די ונטשאַין טעמפּעראַטור.אויב די נומער פון אָנפאַנגער באַסעס איז קליין, די אַנילינג טעמפּעראַטור קענען זיין אַפּראָופּרייטלי געוואקסן, וואָס קענען פאַרגרעסערן די ספּעסיפיקאַטי פון פּקר.אויב די נומער פון באַסעס איז גרויס, די אַנילינג טעמפּעראַטור קענען זיין רידוסט אַפּראָופּרייטלי.די אַנילינג טעמפּעראַטור חילוק צווישן אַ פּאָר פון פּרימערז פון 4 ℃ ~ 6 ℃ וועט נישט ווירקן די פּקר טראָגן, אָבער יידילי די אַנילינג טעמפּעראַטור פון אַ פּאָר פון אָנפאַנגער איז די זעלבע, וואָס קענען בייַטן צווישן 55 ℃ ~ 75 ℃.
4. ויסמיידן די צווייטיק סטרוקטור געגנט פון די אַמפּלאַפאַקיישאַן מוסטער
עס איז בעסטער צו ויסמיידן די צווייטיק סטרוקטור געגנט פון די מוסטער ווען סאַלעקטינג די אַמפּלאַפייד פראַגמענט.די סטאַביל צווייטיק סטרוקטור פון די ציל פראַגמענט קענען זיין פּרעדיקטעד און עסטימאַטעד דורך באַטייַטיק קאָמפּיוטער ווייכווארג, וואָס איז נוציק פֿאַר מוסטער סעלעקציע.עקספּערימענטאַל רעזולטאַטן ווייַזן אַז די יקספּאַנשאַן איז אָפט ניט געראָטן ווען די פריי ענערגיע (△G) פון דער געגנט צו זיין יקספּאַנדיד איז ווייניקער ווי 58.6לקדזש / מאָל.
5. מיסמאַטש מיט ציל דנאַ
ווען די אַמפּלאַפייד ציל דנאַ סיקוואַנס איז גרויס, אַ אָנפאַנגער קען בינדן צו קייפל טיילן פון דער ציל דנאַ, ריזאַלטינג אין קייפל באַנדס אין דער רעזולטאַט.דאָס מאָל עס איז נייטיק צו נוצן די BLAST ווייכווארג טעסטינג, וועבזייטל:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/.אויסקלייַבן ייַנרייען צוויי סיקוואַנסיז (bl2seq).
פּאַסטינג אָנפאַנגער סיקוואַנסיז צו זאָנע 1 און ציל דנאַ סיקוואַנסיז צו זאָנע 2 איז ינטערטשיינדזשאַבאַל, און BLAST קאַלקיאַלייץ קאַמפּלאַמענטשי, אַנטיסענסע און אנדערע פּאַסאַבילאַטיז, אַזוי יוזערז טאָן ניט דאַרפֿן צו באַמערקן צי ביידע קייטן זענען זינען קייטן.איר קענט אויך אַרייַן די GI נומער אויב איר וויסן די GI נומער פון די סיקוואַנס אין די דאַטאַבייס, אַזוי איר טאָן ניט האָבן צו פּאַפּ אַ גרויס אָפּטיילונג פון די סיקוואַנס.צום סוף, גיט ייַנרייען ביי 3 צו זען אויב די אָנפאַנגער האט קייפל האָמאָלאָגאָוס זייטלעך אין די ציל דנאַ.
6. אָנפאַנגער וואָקזאַל
די 3 'סוף פון די אָנפאַנגער איז ווו די פאַרלענגערונג הייבט, אַזוי עס איז וויכטיק צו פאַרמייַדן מיסמאַטשאַז פון סטאַרטינג דאָרט.די 3 'סוף זאָל נישט זיין מער ווי 3 קאָנסעקוטיווע G אָדער C, ווייַל דאָס וועט פאַרשאַפן די אָנפאַנגער צו זיין מיסטייקאַנלי טריגערד אין די G + C ענריטשמענט סיקוואַנס געגנט.די 3 'סוף קענען נישט פאָרעם קיין צווייטיק סטרוקטור, אַחוץ אין ספּעציעל PCR (AS-PCR) ריאַקשאַנז, די 3' סוף פון די אָנפאַנגער קענען ניט זיין מיסמאַטשט.פֿאַר בייַשפּיל, אויב די קאָדירונג געגנט איז אַמפּלאַפייד, די 3 'סוף פון אָנפאַנגער זאָל נישט זיין טערמאַנייטיד אין די דריט שטעלע פון קאָדאָן, ווייַל די דריט שטעלע פון קאָדאָן איז פּראָנע צו דידזשענערייט, וואָס וועט ווירקן די ספּעסיפיקייט און עפעקטיווקייַט פון אַמפּלאַפאַקיישאַן.ווען איר נוצן אַנעקסיישאַן אָנפאַנגער, אָפּשיקן צו די קאָדאָן נוצן טיש, ופמערקזאַמקייט צו בייאַלאַדזשיקאַל ייבערהאַנט, טאָן ניט נוצן אַנעקסיישאַן אָנפאַנגער אין די 3′ סוף, און נוצן אַ העכער קאַנסאַנטריישאַן פון אָנפאַנגער (1uM-3uM).
7. צווייטיק סטרוקטור פון פּרימערז
די פּרימערז זיך זאָל נישט האָבן קאַמפּלאַמענטשי סיקוואַנסיז, אַנדערש די פּרימערז זיך וועט פאַרלייגן אין האַירפּין סטראַקטשערז, און די צווייטיק סטרוקטור וועט ווירקן די ביינדינג פון פּרימערז און טעמפּלאַטעס רעכט צו סטעריק כינדראַנס.אויב קינסטלעך משפט איז געניצט, די קעסיידערדיק קאַמפּלאַמענטשי באַסעס פון פּרימערז זיך זאָל נישט זיין גרעסער ווי 3 בפּ.עס זאָל זיין קיין קאַמפּלאַמענטשיקייט צווישן די צוויי אָנפאַנגער, ספּעציעל די קאַמפּלאַמענטשי אָוווערלאַפּ פון די 3 'סוף זאָל זיין אַוווידיד צו פאַרמייַדן די פאָרמירונג פון אָנפאַנגער דימערס.אין אַלגעמיין, עס זאָל זיין ניט מער ווי 4 קאָנסעקוטיווע באַסעס האָמאָלאָגי אָדער קאַמפּלאַמענטשיקייט צווישן אַ פּאָר פון אָנפאַנגער.
8. לייג מאַרקערס אָדער לאָסי
דער 5 'סוף האט קליין ווירקונג אויף אַמפּלאַפאַקיישאַן ספּעציפֿישקייט און קענען דעריבער זיין מאַדאַפייד אָן אַפעקטינג אַמפּלאַפאַקיישאַן ספּעסיפיקאַטי.די מאָדיפיקאַטיאָן פון אָנפאַנגער 5 'סוף ינקלודעד: אַדינג ענזיים ריסטריקשאַן פּלאַץ;לייבאַלד ביאָטין, פלורעסאַנס, דיגאָקסין, עו3+, אאז"ו ו באַקענען פּראָטעין ביינדינג דנאַ סיקוואַנסיז;ינטראָודוסינג מיוטיישאַן זייטלעך, ינסערטינג און פעלנדיק מיוטיישאַן סיקוואַנסיז און ינטראָודוסינג פּראָמאָטער סיקוואַנסיז, אאז"ו ו. די עקסטרע באַסעס וועט מער אָדער ווייניקער ווירקן די עפעקטיווקייַט פון אַמפּלאַפאַקיישאַן און פאַרגרעסערן די געלעגנהייַט פון אָנפאַנגער דימער פאָרמירונג, אָבער עטלעכע הנחות מוזן זיין געמאכט פֿאַר די ווייַטער שריט.נאָך סיקוואַנסיז וואָס טאָן ניט עקסיסטירן אויף די ציל סיקוואַנס, אַזאַ ווי ריסטריקשאַן זייטלעך און פּראָמאָטער סיקוואַנסיז, קענען זיין מוסיף צו די 5′ סוף פון די אָנפאַנגער אָן אַפעקטינג ספּעציפֿישקייט.די סיקוואַנסיז זענען נישט אַרייַנגערעכנט אין די כעזשבן פון אָנפאַנגער טם וואַלועס, אָבער זאָל זיין טעסטעד פֿאַר קאַמפּלאַמענטשיקייט און ינערלעך צווייטיק סטרוקטור.
9. סובקלאָנעס
רובֿ פון די צייט, PCR איז בלויז פּרילימאַנערי קלאָונינג, און דעמאָלט מיר דאַרפֿן צו סאַבקלאָנע די ציל פראַגמענט אין פאַרשידן וועקטאָרס, אַזוי מיר דאַרפֿן צו פּלאַן נאָך באַסעס פֿאַר די ווייַטער אָפּעראַציע אין די PCR שריט.
עטלעכע סיקוואַנסיז דיזיינד פֿאַר סובקלאָנינג זענען סאַמערייזד אונטן.
ריסטריקשאַן ענדאָנוקלעאַסע ריסטריקשאַן פּלאַץ איז צוגעגעבן
אַדינג ענזיים ריסטריקשאַן זייטלעך איז די מערסט קאַמאַנלי געניצט אופֿן פֿאַר סאַבקלאַנינג פּקר פּראָדוקטן.בכלל, די קלעאַוואַגע פּלאַץ איז זעקס באַסעס, אין דערצו צו די 5 'סוף פון די קלעאַוואַגע פּלאַץ דאַרפֿן צו לייגן 2 ~ 3 פּראַטעקטיוו באַסעס.אָבער, די נומער פון פּראַטעקטיוו באַסעס פארלאנגט דורך פאַרשידענע ענזימעס איז אַנדערש.פֿאַר בייַשפּיל, SalⅠ ריקווייערז קיין פּראַטעקטיוו באַזע, EcoRⅤ ריקווייערז 1 פּראַטעקטיוו באַזע, ניטⅠ ריקווייערז 2 פּראַטעקטיוו באַסעס, און Hind Ⅲ ריקווייערז 3 פּראַטעקטיוו באַסעס.
LIC מוסיף די עק
די פול נאָמען פון LIC איז ליגאַטיאָן ינדעפּענדענט קלאָונינג, אַ קלאָונינג אופֿן ינווענטיד דורך Navogen ספּאַסיפיקלי פֿאַר זיין טייל פון די פּעט וועקטאָר.די PET טרעגער צוגעגרייט דורך LIC אופֿן האט ניט-קאָמפּלעמענטאַרי 12-15 באַזע קלעפּיק ענדס פון איין שנירל, וואָס דערגאַנג די קאָראַספּאַנדינג קלעפּיק ענדס אויף די ציל אַרייַנלייגן פראַגמענט.פֿאַר אַמפּלאַפאַקיישאַן צוועקן, די אָנפאַנגער 5′ סיקוואַנס פון די ינסערטאַד פראַגמענט זאָל דערגאַנג די LIC וועקטאָר.די 3′→5′ עקסטראַנעקט טעטיקייט פון ט 4 דנאַ פּאָלימעראַסע קענען פאָרעם אַ איין שנירל קלעפּיק סוף אויף די ינסערטאַד פראַגמענט נאָך אַ קורץ צייט.ווייַל די פּראָדוקט קענען זיין געשאפן בלויז פון די קעגנצייַטיק אַנילינג פון די צוגעגרייט אַרייַנלייגן פראַגמענט און די וועקטאָר, דעם אופֿן איז זייער שנעל און עפעקטיוו, און עס איז דירעקטעד קלאָונינג.
דירעקטעד טאַ קלאָון לייגן עק
TA קלאָונינג איז ניט ביכולת צו ציל די פראַגמענט אין אַ וועקטאָר, אַזוי שפּעטער ינוויטראָגען ינטראָודוסט אַ וועקטאָר וואָס קען ציל קלאָונינג, וואָס קאַנטיינד פיר באַוווסט באַזע GTGGS אין איין סוף.דעריבער, אין די פּלאַן פון פּקר אָנפאַנגער, קאַמפּלאַמענטשי סיקוואַנסיז זאָל זיין מוסיף אַקאָרדינגלי, אַזוי פראַגמאַנץ קענען זיין "אָריענטיד".
אויב איר האָט קורץ צייט, איר קענען פּרובירן דירעקט סינטעז, קאַמביינינג די דזשין מיט די וועקטאָר, וואָס איז וואָס מיר רופן ET דזשין סינטעז אין מוסקולאַריסץ.
ד אין-פוסיאָן קלאָונינג אופֿן
ניט ליגאַסע פארלאנגט, קיין לאַנג אָפּרוף פארלאנגט.ווי לאַנג ווי אַ סיקוואַנס אין ביידע ענדס פון די לינעאַרייזד וועקטאָר איז ינטראָודוסט אין די פּלאַן פון פּרימערז, די פּקר פּראָדוקט און די לינעאַרייזד וועקטאָר זענען מוסיף אין די אין-פוסיאָן ענזיים לייזונג מיט BSA און שטעלן אין צימער טעמפּעראַטור פֿאַר אַ האַלב שעה, די טראַנספאָרמאַציע קענען זיין דורכגעקאָכט.דעם אופֿן איז דער הויפּט פּאַסיק פֿאַר קאַנווערזשאַן פון גרויס באַנד.
10. צונויפגיסן אָנפאַנגער
מאל, בלויז לימיטעד סיקוואַנס אינפֿאָרמאַציע איז באַוווסט וועגן אָנפאַנגער פּלאַן.פֿאַר בייַשפּיל, אויב בלויז די אַמינאָ זויער סיקוואַנס איז באַוווסט, די מערדזשינג אָנפאַנגער קענען זיין דיזיינד.א מערדזשער אָנפאַנגער איז אַ געמיש פון פאַרשידענע סיקוואַנסיז רעפּריזענטינג אַלע די פאַרשידענע באַזע פּאַסאַבילאַטיז וואָס ענקאָוד אַ איין אַמינאָ זויער.צו פאַרגרעסערן ספּעציפֿישקייט, איר קענען אָפּשיקן צו די קאָדאָן נוצן טיש צו רעדוצירן אַנעקסיישאַן לויט די בייזע נוצן פּרעפֿערענצן פון פאַרשידענע אָרגאַניזאַמז.היפּאָקסאַנטהינע קענען זיין פּערד מיט אַלע די באַסעס צו רעדוצירן די אַנילינג טעמפּעראַטור פון די אָנפאַנגער.דו זאלסט נישט נוצן די אַנעקסעד באַסעס אין די 3 ′ סוף פון די אָנפאַנגער ווייַל די אַנילינג פון די לעצטע 3 באַסעס אין די 3 ′ סוף איז גענוג צו אָנהייבן פּקר אויף דעם אומרעכט פּלאַץ.העכער אָנפאַנגער קאַנסאַנטריישאַנז (1μM צו 3μM) זענען געניצט ווייַל אָנפאַנגער אין פילע אַנעקסיישאַן מיקסטשערז זענען נישט ספּעציפיש צו די ציל מוסטער.
פּקר רוי מאַטעריאַלסקאָנטראָל
1. אָנפאַנגער קוואַנטיטי
די קאַנסאַנטריישאַן פון יעדער אָנפאַנגער איז 0.1 ~ 1 ומאָל אָדער 10 ~ 100 פּמאָל.עס איז בעסער צו פּראָדוצירן די פארלאנגט רעזולטאַט מיט די לאָואַסט סומע פון אָנפאַנגער.הויך קאַנסאַנטריישאַן פון אָנפאַנגער וועט פאַרשאַפן מיסמאַטטש און ניט-ספּעציפיש אַמפּלאַפאַקיישאַן, און פאַרגרעסערן די געלעגנהייַט פון פאָרמינג דימערז צווישן פּרימערז.
2. אָנפאַנגער קאַנסאַנטריישאַן
די קאַנסאַנטריישאַן פון פּרימערז אַפעקץ די ספּעציפֿישקייט.די אָפּטימאַל קאַנסאַנטריישאַן פון אָנפאַנגער איז בכלל צווישן 0.1 און 0.5μם.העכער אָנפאַנגער קאַנסאַנטריישאַנז פירן צו אַמפּלאַפאַקיישאַן פון ניט-ספּעציפיש פּראָדוקטן.
3. אַנילינג טעמפּעראַטור פון אָנפאַנגער
אן אנדער וויכטיק פּאַראַמעטער פֿאַר אָנפאַנגער איז די מעלטינג טעמפּעראַטור (טם).דאָס איז דער טעמפּעראַטור ווען 50% פון די אָנפאַנגער און קאַמפּלאַמענטשי סיקוואַנסיז זענען רעפּריזענטיד ווי טאָפּל-סטראַנדיד דנאַ מאַלאַקיולז.טם איז פארלאנגט צו שטעלן פּקר אַנילינג טעמפּעראַטור.ידעאַללי, די אַנילינג טעמפּעראַטור איז נידעריק גענוג צו ענשור עפעקטיוו אַנילינג פון די פּרימערז מיט די ציל סיקוואַנס, אָבער הויך גענוג צו רעדוצירן די ניט-ספּעציפיש ביינדינג.גלייַך אַנילינג טעמפּעראַטור פון 55 ℃ צו 70 ℃.אַנילינג טעמפּעראַטור איז בכלל באַשטימט 5 ℃ נידעריקער ווי טם פון אָנפאַנגער.
עס זענען עטלעכע פאָרמולאַס פֿאַר באַשטעטיקן טם, וואָס בייַטן זייער דיפּענדינג אויף די פאָרמולע געניצט און די סיקוואַנס פון אָנפאַנגער.ווייַל רובֿ פאָרמולאַס צושטעלן אַ עסטימאַטעד טם ווערט, אַלע אַנילינג טעמפּעראַטורעס זענען בלויז אַ סטאַרטינג פונט.ספּעסיפיקאַטי קענען זיין ימפּרוווד דורך אַנאַלייזינג עטלעכע ריאַקשאַנז וואָס פּראַגרעסיוו פאַרגרעסערן די אַנילינג טעמפּעראַטור.אָנהייב אונטער די עסטימאַטעד טם -5 ℃, און ביסלעכווייַז פאַרגרעסערן די אַנילינג טעמפּעראַטור אין אַ ינקראַמאַנט פון 2 ℃.העכער אַנילינג טעמפּעראַטור וועט רעדוצירן די פאָרמירונג פון אָנפאַנגער דימערז און ניט-ספּעציפיש פּראָדוקטן.פֿאַר בעסטער רעזולטאַטן, די צוויי אָנפאַנגער זאָל האָבן דערנענטערנ טם וואַלועס.אויב די Tm חילוק פון אָנפאַנגער פּערז איז מער ווי 5 ℃, די אָנפאַנגער וועט ווייַזן אַ באַטייטיק פאַלש אָנהייב דורך ניצן אַ נידעריקער אַנילינג טעמפּעראַטור אין די ציקל.אויב די צוויי אָנפאַנגערס טם זענען אַנדערש, שטעלן די אַנילינג טעמפּעראַטור צו 5 ℃ נידעריקער ווי די לאָואַסט טם.אַלטערנאַטיוועלי, צו פאַרגרעסערן ספּעסיפיקאַטי, פינף סייקאַלז קענען זיין דורכגעקאָכט ערשטער ביי אַנילינג טעמפּעראַטורעס דיזיינד פֿאַר העכער טם, נאכגעגאנגען דורך די רוען סייקאַלז ביי אַנילינג טעמפּעראַטורעס דיזיינד פֿאַר נידעריקער טם.דאָס אַלאַוז איר צו באַקומען אַ פּאַרטיייש קאָפּיע פון די דעסטיניישאַן מוסטער אונטער ענג טנאָים.
4. אָנפאַנגער ריינקייַט און פעסטקייַט
דער נאָרמאַל ריינקייַט פון מנהג פּרימערז איז טויגן פֿאַר רובֿ פּקר אַפּלאַקיישאַנז.די באַזייַטיקונג פון בענזויל און יסאָבוטיליל גרופּעס דורך דעסאַלטינג איז מינימאַל און דעריבער טוט נישט אַרייַנמישנ זיך מיט פּקר.עטלעכע אַפּלאַקיישאַנז דאַרפן רייניקונג צו באַזייַטיקן ניט-פול-לענג סיקוואַנסיז אין די סינטעז פּראָצעס.די טראַנגקייטיד סיקוואַנסיז פאַלן ווייַל די עפעקטיווקייַט פון דנאַ סינטעז כעמיע איז נישט 100%.דאָס איז אַ קייַלעכיק פּראָצעס וואָס ניצט ריפּיטיד כעמישער ריאַקשאַנז ווי יעדער באַזע איז צוגעגעבן צו מאַכן דנאַ פון 3′ צו 5′.איר קענען פאַרלאָזן אין יעדער ציקל.לענגערע אָנפאַנגערס, ספּעציעל די מער ווי 50 באַסעס, האָבן אַ גרויס פּראָפּאָרציע פון טראַנגקייטיד סיקוואַנסיז און קען דאַרפן רייניקונג.
די טראָגן פון פּרימערז איז אַפעקטאַד דורך די עפעקטיווקייַט פון סינטעטיש כעמיע און רייניקונג אופֿן.ביאָפאַרמאַסוטיקאַל קאָמפּאַניעס, אַזאַ ווי סיטאָלאָגי און שענגאָנג, אַלע נוצן אַ מינימום אָד אַפּאַראַט צו ענשור די גאַנץ פּראָדוקציע פון אָליגאָנוקלעאָסידע.מנהג פּרימערז זענען שיפּט אין טרוקן פּודער פאָרעם.עס איז בעסטער צו רידיסאַלווז די פּרימערז אין טע אַזוי אַז די לעצט קאַנסאַנטריישאַן איז 100μם.TE איז בעסער ווי דעיאָניזעד וואַסער ווייַל די ף פון וואַסער איז אָפט אַסידיק און וועט פאַרשאַפן די כיידראַלאַסאַס פון אָליגאָנוקלעאָסידעס.
די פעסטקייַט פון פּרימערז דעפּענדס אויף סטאָרידזש טנאָים.טרוקן פּודער און צעלאָזן פּרימערז זאָל זיין סטאָרד בייַ -20 ℃.פּרימערז צעלאָזן אין טע אין קאַנסאַנטריישאַנז העכער ווי 10μם קענען זיין סטאָרד סטאַביל ביי -20 ℃ פֿאַר 6 חדשים, אָבער קענען זיין סטאָרד בלויז אין צימער טעמפּעראַטור (15 ℃ צו 30 ℃) פֿאַר ווייניקער ווי 1 וואָך.טרוקן פּודער פּרימערז קענען זיין סטאָרד ביי -20 C פֿאַר בייַ מינדסטער 1 יאָר און אין צימער טעמפּעראַטור (15 C צו 30 C) פֿאַר אַרויף צו 2 חדשים.
5. ענזימעס און זייער קאַנסאַנטריישאַנז
דערווייַל, די טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע געניצט איז בייסיקלי די דזשין ינזשעניעריע ענזיים סינטאַסייזד דורך קאָליפאָרם באַקטיריאַ.די סומע פון ענזיים דארף צו קאַטאַליזירן אַ טיפּיש פּקר אָפּרוף איז וועגן 2.5 ו (רעפערס צו די גאַנץ אָפּרוף באַנד פון 100ul).אויב די קאַנסאַנטריישאַן איז צו הויך, דאָס קען פירן צו ניט-ספּעציפיש אַמפּלאַפאַקיישאַן;אויב די קאַנסאַנטריישאַן איז צו נידעריק, די סומע פון סינטעטיש פּראָדוקט וועט זיין רידוסט.
6. קוואַליטעט און קאַנסאַנטריישאַן פון דנטפּ
די קוואַליטעט פון דנטפּ איז ענג שייַכות צו די קאַנסאַנטריישאַן און די עפעקטיווקייַט פון פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן.די דנטפּ פּודער איז גראַניאַלער, און זייַן וועריאַביליטי פארלירט זיין בייאַלאַדזשיקאַל טעטיקייט אויב עס איז ימפּראַפּערלי סטאָרד.דנטפּ לייזונג איז אַסידיק, און זאָל זיין געניצט אין הויך קאַנסאַנטריישאַן, מיט 1 ם נאַאָה אָדער 1 ם טריס.הקל באַפער לייזונג צו סטרויערן זייַן ף צו 7.0 ~ 7.5, קליין סומע פון סאַב-פּאַקיינג, פאַרפרוירן סטאָרידזש ביי -20 ℃.קייפל פרירן-טאָווינג וועט דיגרייד דנטפּ.אין פּקר אָפּרוף, דנטפּ זאָל זיין 50 ~ 200 ומאָל / ל.ספּעציעל ופמערקזאַמקייט זאָל זיין באַצאָלט צו די קאַנסאַנטריישאַן פון די פיר דנטפּס זאָל זיין גלייַך (גלייַך בראָדעווקע צוגרייטונג).אויב די קאַנסאַנטריישאַן פון איינער פון זיי איז אַנדערש פון די אנדערע (העכער אָדער נידעריקער), מיסמאַטטש וועט זיין געפֿירט.צו נידעריק קאַנסאַנטריישאַן וועט רעדוצירן די טראָגן פון פּקר פּראָדוקטן.דנטפּ קענען פאַרבינדן מיט Mg2+ און רעדוצירן די קאַנסאַנטריישאַן פון פריי מג2+.
7. מוסטער (ציל דזשין) נוקלעיק זויער
די סומע און רייניקונג גראַד פון טעמפּלאַטע נוקלעיק זויער איז איינער פון די שליסל פֿאַרבינדונגען פֿאַר די הצלחה אָדער דורכפאַל פון פּקר.די בעקאַבאָלעדיק דנאַ רייניקונג מעטהאָדס יוזשאַוואַלי נוצן SDS און פּראָטעאַסע ק צו דיידזשעסטיד און דיידזשעסטיד ספּעסאַמאַנז.די הויפּט פאַנגקשאַנז פון SDS זענען: צעלאָזן ליפּידס און פּראָטעינס אויף דער צעל מעמבראַנע, אַזוי דיסטרויינג די צעל מעמבראַנע דורך צעלאָזן מעמבראַנע פּראָטעינס, און דיססאָסיאַטע יאָדער פּראָטעינס אין דער צעל, SDS קענען אויך פאַרבינדן מיט פּראָטעינס און אָפּזאַץ;פּראָטעאַסע ק קענען כיידראַליזירן און דיידזשעסטיד פּראָטעינס, ספּעציעל היסטאָנעס געבונדן מיט דנאַ, און דעמאָלט נוצן אָרגאַניק סאַלוואַנט פענאָל און טשלאָראָפאָרם צו עקסטראַקט פּראָטעינס און אנדערע צעל קאַמפּאָונאַנץ, און נוצן עטאַנאָל אָדער יסאָפּראָפּיל אַלקאָהאָל צו אָפּזאַץ נוקלעיק זויער.די יקסטראַקטיד נוקלעיק זויער קענען זיין געוויינט ווי אַ מוסטער פֿאַר פּקר ריאַקשאַנז.פֿאַר גענעראַל קליניש דיטעקשאַן ספּעסאַמאַנז, אַ שנעל און פּשוט אופֿן קענען ווערן גענוצט צו צעלאָזן סעלז, ליסייט פּאַטאַדזשאַנז, דיידזשעסטיד און באַזייַטיקן פּראָטעינס פון טשראָמאָסאָמעס צו פריי ציל גענעס, און גלייך געניצט פֿאַר פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן.רנאַ מוסטער יקסטראַקשאַן יוזשאַוואַלי ניצט גואַנידינע יסאָטהיאָסיאַנאַטע אָדער פּראָטעאַסע ק אופֿן צו פאַרמייַדן רנאַסע פון דיגריידינג רנאַ.
8.מג2+ קאַנסאַנטריישאַן
Mg2+ האט אַ באַטייטיק ווירקונג אויף די ספּעסיפיקאַטי און טראָגן פון פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן.אין אַלגעמיין, פּקר אָפּרוף, ווען די קאַנסאַנטריישאַן פון פאַרשידן דנטפּ איז 200 ומאָל / ל, די צונעמען קאַנסאַנטריישאַן פון מג 2 + איז 1.5 ~ 2.0 ממאָל / ל.די קאַנסאַנטריישאַן פון Mg2+ איז צו הויך, די אָפּרוף ספּעסיפיקאַטי דיקריסאַז, ניט-ספּעציפיש אַמפּלאַפאַקיישאַן אַקערז, צו נידעריק קאַנסאַנטריישאַן וועט רעדוצירן די טעטיקייט פון טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע, ריזאַלטינג אין די רעדוקציע פון רעאַקציע פּראָדוקטן.
מאַגנעסיום ייאַנז ווירקן עטלעכע אַספּעקץ פון פּקר, אַזאַ ווי דנאַ פּאָלימעראַסע טעטיקייט, וואָס אַפעקץ טראָגן;אן אנדער ביישפּיל איז אָנפאַנגער אַנילינג, וואָס אַפעקץ ספּעסיפיקאַטי.דנטפּ און מוסטער בינדן צו מאַגניזיאַם יאָן, רידוסינג די סומע פון פריי מאַגניזיאַם יאָן פארלאנגט פֿאַר ענזיים טעטיקייט.די אָפּטימאַל קאַנסאַנטריישאַן פון מאַגניזיאַם יאָן וועריז פֿאַר פאַרשידענע אָנפאַנגער פּערז און טעמפּלאַטעס, אָבער אַ טיפּיש פּקר סטאַרטינג קאַנסאַנטריישאַן מיט 200 μM dNTP איז 1.5 מם (באַמערקונג: פֿאַר פאַקטיש-צייט קוואַנטיטאַטיווע פּקר, נוצן 3 צו 5 מם מאַגניזיאַם יאָן לייזונג מיט אַ פלורעסאַנט זאָנד).העכער קאַנסאַנטריישאַנז פון פריי מאַגניזיאַם ייאַנז פאַרגרעסערן טראָגן, אָבער אויך פאַרגרעסערן ניט-ספּעציפיש אַמפּלאַפאַקיישאַן און פאַרמינערן פאַדעלאַטי.צו באַשטימען די אָפּטימאַל קאַנסאַנטריישאַן, מאַגניזיאַם יאָן טיטריישאַנז זענען דורכגעקאָכט אין ינגקראַמאַנץ פון 0.5 מם פון 1 מם צו 3 מם.צו רעדוצירן די אָפענגיקייַט אויף מאַגניזיאַם יאָן אַפּטאַמאַזיישאַן, פּלאַטינום טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע קענען זיין געוויינט.פּלאַטינום טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע איז ביכולת צו טייַנען פונקציאָנירן איבער אַ ברייט קייט פון מאַגניזיאַם יאָן קאַנסאַנטריישאַנז ווי טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע און דעריבער ריקווייערז ווייניקער אַפּטאַמאַזיישאַן.
9. פּקר-פּראַמאָוטינג אַדאַטיווז
אָפּטימיזאַטיאָן פון אַנילינג טעמפּעראַטור, אָנפאַנגער פּלאַן און מאַגניזיאַם יאָן קאַנסאַנטריישאַן איז גענוג פֿאַר העכסט ספּעציפיש אַמפּלאַפאַקיישאַן פון רובֿ טעמפּלאַטעס;אָבער, עטלעכע טעמפּלאַטעס, אַרייַנגערעכנט יענע מיט הויך גק אינהאַלט, דאַרפן נאָך מיטלען.אַדאַטיווז וואָס ווירקן די מעלטינג טעמפּעראַטור פון דנאַ צושטעלן אן אנדער וועג צו פֿאַרבעסערן פּראָדוקט ספּעסיפיקאַטי און טראָגן.גאַנץ דינאַטוראַטיאָן פון די מוסטער איז פארלאנגט פֿאַר בעסטער רעזולטאַטן.
אין דערצו, די צווייטיק סטרוקטור פּריווענץ אָנפאַנגער ביינדינג און ענזיים פאַרלענגערונג.
פּקר אַדאַטיווז, אַרייַנגערעכנט פאָרמאַמידע, דמסאָ, גליסערין, בעטאַינע און פּקרקס ענכאַנסער לייזונג, פֿאַרבעסערן אַמפּלאַפאַקיישאַן.זייער מעגלעך מעקאַניזאַם איז צו רעדוצירן די מעלטינג טעמפּעראַטור, אַזוי אַידינג די אַנילינג פון אָנפאַנגערס און אַסיסטינג דנאַ פּאָלימעראַסע פאַרלענגערונג דורך די צווייטיק סטרוקטור געגנט.PCRx לייזונג האט אנדערע אַדוואַנטידזשיז.מינימאַל אַפּטאַמאַזיישאַן פון מאַגניזיאַם יאָן איז פארלאנגט ווען געוויינט מיט פּלאַטינום טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע און פּלאַטינום פּפקס דנאַ פּאָלימעראַסע.אזוי, די פּלאַטינום טעכניק איז קאַמביינד מיט די אַדאַטיוו צו פאַרגרעסערן ספּעסיפיסיטי בשעת רידוסינג די אָפענגיקייַט פון די דריט צוגאַנג, מאַגניזיאַם יאָן אַפּטאַמאַזיישאַן.פֿאַר בעסטער רעזולטאַטן, די קאַנסאַנטריישאַן פון אַדאַטיווז זאָל זיין אָפּטימיזעד, ספּעציעל DMSO, פאָרמאַמידע און גליסעראָל, וואָס ינכיבאַט טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע.
פאָרעאַסי טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע
10. הייס אָנהייב
הייס אָנהייב פּקר איז איינער פון די מערסט וויכטיק מעטהאָדס צו פֿאַרבעסערן פּקר ספּעסיפיקאַטי אין אַדישאַן צו גוט אָנפאַנגער פּלאַן.כאָטש די אָפּטימאַל ילאָנגגיישאַן טעמפּעראַטור פון טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע איז 72 ℃, די פּאָלימעראַסע בלייבט אַקטיוו אין צימער טעמפּעראַטור.אַזוי, ניט-ספּעציפיש פּראָדוקטן זענען געשאפן ווען די האלטן טעמפּעראַטור איז נידעריקער ווי די אַנילינג טעמפּעראַטור בעשאַס דער צוגרייטונג פון די פּקר אָפּרוף און אין די אָנהייב פון די טערמאַל ציקל.אַמאָל געשאפן, די ניט-ספּעציפיש פּראָדוקטן זענען יפעקטיוולי אַמפּלאַפייד.הייס-אָנהייב פּקר איז דער הויפּט עפעקטיוו ווען די זייטלעך געניצט פֿאַר אָנפאַנגער פּלאַן זענען לימיטעד דורך די אָרט פון גענעטיק עלעמענטן, אַזאַ ווי פּלאַץ-דירעקטעד מיוטיישאַנז, אויסדרוק קלאָונינג אָדער קאַנסטראַקשאַן און מאַניפּיאַליישאַן פון גענעטיק עלעמענטן געניצט פֿאַר דנאַ ינזשעניעריע.
א פּראָסט אופֿן צו באַגרענעצן די טעטיקייט פון טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע איז צו צוגרייטן פּקר אָפּרוף לייזונג אויף אייז און שטעלן עס אין אַ פּרעהעאַטעד פּקר אַפּאַראַט.דעם אופֿן איז פּשוט און ביליק, אָבער עס טוט נישט פאַרענדיקן די טעטיקייט פון די ענזיים און דעריבער טוט נישט גאָר עלימינירן די אַמפּלאַפאַקיישאַן פון ניט-ספּעציפיש פּראָדוקטן.
טערמאַל פּרימינג דילייז דנאַ סינטעז דורך ינכיבאַטינג אַ יקערדיק קאָמפּאָנענט ביז די פּקר אַפּאַראַט ריטשאַז דינאַטוריישאַן טעמפּעראַטור.רובֿ מאַנואַל טערמאַל ינישיישאַן מעטהאָדס, אַרייַנגערעכנט דילייד אַדישאַן פון טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע, זענען קאַמבערסאַם, ספּעציעל פֿאַר הויך-טראַפּוט אַפּלאַקיישאַנז.אנדערע טערמאַל פּרימינג מעטהאָדס נוצן אַ וואַקס שילד צו אַרומנעמען אַ יקערדיק קאָמפּאָנענט, אַרייַנגערעכנט מאַגניזיאַם ייאַנז אָדער ענזימעס, אָדער צו פיזיקלי יזאָלירן ריאַקטיוו קאַמפּאָונאַנץ, אַזאַ ווי טעמפּלאַטעס און באַפערז.בעשאַס די טערמאַל ציקל, די פאַרשידן קאַמפּאָונאַנץ זענען באפרייט און געמישט צוזאַמען ווי די וואַקס מעלץ.ווי די מאַנואַל הייס אָנהייב אופֿן, די וואַקס שילד אופֿן איז קאַמבערסאַם און פּראָנע צו קאַנטאַמאַניישאַן און איז נישט פּאַסיק פֿאַר הויך טרופּוט אַפּלאַקיישאַנז.
פּלאַטינום דנאַ פּאָלימעראַסע איז באַקוועם און עפעקטיוו פֿאַר אָטאַמאַטיק הייס אָנהייב פּקר.פּלאַטינום טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע באשטייט פון רעקאָמבינאַנט טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע קאַמביינד מיט מאָנאָקלאָנאַל אַנטיבאָדי קעגן טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע.די אַנטיבאָדיעס זענען פארמולירט דורך פּקר צו ינכיבאַט ענזיים טעטיקייט בעשאַס פּראַלאָנגד טעמפּעראַטור האלטן.טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע איז געווען רעלעאַסעד אין דער אָפּרוף בעשאַס די 94 ℃ ינסאַליישאַן פון די דינאַטוראַטיאָן שריט, ריסטאָרינג פול פּאָלימעראַסע טעטיקייט.אין קאַנטראַסט צו כעמיש מאַדאַפייד טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע פֿאַר טערמאַל ינישיישאַן, פּלאַטינום ענזיים טוט נישט דאַרפן פּראַלאָנגד ינסאַליישאַן ביי 94 ℃ (10-15 מינוט) צו אַקטאַווייט די פּאָלימעראַסע.מיט PlatinumTaq DNA פּאָלימעראַסע, 90% פון Taq DNA פּאָלימעראַסע טעטיקייט איז געווען געזונט נאָך 2 מינוט ביי 94 ℃.
פאָרעאַסי הס טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע
11. נעסט-פּקר
סאַקסעסיוו ראָונדס פון אַמפּלאַפאַקיישאַן ניצן נעסטעד פּרימערז קענען פֿאַרבעסערן ספּעסיפיקאַטי און סענסיטיוויטי.דער ערשטער קייַלעכיק איז אַ נאָרמאַל אַמפּלאַפאַקיישאַן פון 15-20 סייקאַלז.א קליין בראָכצאָל פון די ערשט אַמפּלאַפאַקיישאַן פּראָדוקט איז דיילוטאַד 100-1000 מאל און צוגעגעבן צו די רגע קייַלעכיק פון אַמפּלאַפאַקיישאַן פֿאַר 15-20 סייקאַלז.אַלטערנאַטיוועלי, די ערשט אַמפּלאַפייד פּראָדוקט קענען זיין סייזד דורך געל רייניקונג.א נעסטעד אָנפאַנגער איז געניצט אין די רגע קייַלעכיק פון אַמפּלאַפאַקיישאַן, וואָס קענען בינדן צו די ציל סיקוואַנס אין דער ערשטער אָנפאַנגער.די נוצן פון נעסטעד פּקר ראַדוסאַז די מעגלעכקייט פון אַמפּלאַפאַקיישאַן פון קייפל ציל זייטלעך ווייַל עס זענען ווייניק ציל סיקוואַנסיז קאַמפּלאַמענטשי צו ביידע שטעלט פון פּרימערז.דער זעלביקער גאַנץ נומער פון סייקאַלז (30-40) מיט די זעלבע פּרימערז אַמפּלאַפייד די ניט-ספּעציפיש זייטלעך.נעסטעד פּקר ינקריסאַז די סענסיטיוויטי פון לימיטעד ציל סיקוואַנסיז (למשל, זעלטן מרנאַס) און ימפּרוווז די ספּעסיפיסיטי פון שווער פּקרס (למשל 5′ RACE).
12. דעססענדינג פּקר
דעססענדינג פּקר ימפּרוווז ספּעסיפיקאַטי דורך ניצן ענג אַנילינג טנאָים פֿאַר די ערשטער ביסל סייקאַלז פון פּקר.דער ציקל סטאַרץ ביי אַ אַנילינג טעמפּעראַטור בעערעך 5 ℃ העכער ווי די עסטימאַטעד טם, און יעדער ציקל איז רידוסט דורך 1 ℃ צו 2 ℃ ביז די אַנילינג טעמפּעראַטור איז אונטער טם 5 ℃.בלויז די דעסטיניישאַן מוסטער מיט די העכסטן האָמאָלאָגי וועט זיין אַמפּלאַפייד.די פּראָדוקטן פאָרזעצן צו יקספּאַנד אין סאַבסאַקוואַנט סייקאַלז, ענגשאַפט די אַמפּלאַפייד ניט-ספּעציפיש פּראָדוקטן.דעססענדינג פּקר איז נוציק פֿאַר מעטהאָדס ווו די גראַד פון האָמאָלאָגי צווישן אָנפאַנגער און ציל מוסטער איז נישט באַוווסט, אַזאַ ווי AFLP DNA פינגערפּרינטינג.
פֿאַרבונדענע פּקר קיץ
די 2 × פּקר העלדTMמיקס סיסטעם האט העכער טאָלעראַנץ צו פּקר ינכיבאַטערז ווי דער פּראָסט פּקר מיקס סיסטעם, און קענען לייכט קאָפּע מיט פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן פון פאַרשידן קאָמפּלעקס טעמפּלאַטעס.די יינציק אָפּרוף סיסטעם און הויך-עפעקטיווקייַט Taq Hero מאַכן די PCR אָפּרוף האָבן העכער אַמפּלאַפאַקיישאַן עפעקטיווקייַט, ספּעסיפיקאַטי און סענסיטיוויטי.
העכער אַמפּלאַפאַקיישאַן עפעקטיווקייַט
עס האט 5'→3' דנאַ פּאָלימעראַסע טעטיקייט און 5'→3' עקסאָנוקלאַסע טעטיקייט, אָן 3'→5' עקסאָנוקלעאַסע טעטיקייט.
פאַקטיש צייט PCR Easyᵀᴹ-SYBR גרין איך קיט
ספּעציפיש-אָפּטימיזעד באַפער און הייס-אָנהייב טאַק ענזיים קענען פאַרמייַדן ניט-ספּעציפיש אַמפּלאַפאַקיישאַן און אָנפאַנגער דימער פאָרמירונג
הויך סענסיטיוויטי - קענען דעטעקט נידעריק קאָפּיעס פון מוסטער
RT-PCR Easyᵀᴹ איך (איין סטעפּ)
די קיט ניצט אַ יינציק Foregene פאַרקערט טראַנסקריפּציע רייידזשאַנט און Foregene HotStar Taq DNA פּאָלימעראַסע קאַמביינד מיט אַ יינציק אָפּרוף סיסטעם צו יפעקטיוולי פֿאַרבעסערן די אַמפּלאַפאַקיישאַן עפעקטיווקייַט און ספּעציפֿישקייט פון דער אָפּרוף.
פּאָסטן צייט: מאי-09-2023
