1. יקערדיק וויסן (אויב איר ווילן צו זען די יקספּערמענאַל טייל, ביטע אַריבערפירן גלייַך צו די רגע טייל)

ווי אַ דעריוואַט אָפּרוף פון קאַנווענשאַנאַל PCR, פאַקטיש צייט PCR מאָניטאָרס דער הויפּט די ענדערונג פון די סומע פון ​​​​אַמפּלאַפאַקיישאַן פּראָדוקט אין יעדער ציקל פון די PCR אַמפּלאַפאַקיישאַן אָפּרוף אין פאַקטיש צייט דורך די ענדערונג פון די פלואָרעססענסע סיגנאַל, און קוואַנטיטאַטיווע אַנאַליזעס די סטאַרטינג מוסטער דורך די שייכות צווישן די CT ווערט און די נאָרמאַל ויסבייג.

די ספּעציפיש דאַטן פון RT-PCR זענעןבאַסעלינע, פלורעסאַנס שוועלאוןקט ווערט.

פּראָסט לייבלינג מעטהאָדס פֿאַר RT-PCR:

2. עקספּערימענטאַל סטעפּס

2.1 וועגן די יקספּערמענאַל גרופּינג- עס מוזן זיין קייפל וועלז אין דער גרופּע, און עס מוזן זיין בייאַלאַדזשיקאַל רעפּאַטישאַנז.

2.2 פּרינסאַפּאַלז פון אָנפאַנגער פּלאַן

①סירנאַ איז מינים-ספּעציפיש, און די סיקוואַנסיז פון פאַרשידענע מינים וועט זיין אַנדערש.

②סירנאַ איז פּאַקידזשד אין פרירן-דאַר פּודער, וואָס קענען זיין סטאָרד סטאַביל פֿאַר 2-4 וואָכן אין צימער טעמפּעראַטור.

2.3 מכשירים אָדער רייידזשאַנץ וואָס דאַרפֿן צו זיין צוגעגרייט אין שטייַגן

2.4 וועגן די ישוז וואָס דאַרפֿן צו זיין אכטונג צו אין די ספּעציפיש יקספּערמענאַל סטעפּס:

①סירנאַ טראַנספעקשאַן פּראָצעס

1. פֿאַר פּלייטינג, איר קענען קלייַבן 24-געזונט טעלער, 12-געזונט טעלער אָדער 6-געזונט טעלער (די דורכשניטלעך רנאַ קאַנסאַנטריישאַן פארגעלייגט אין יעדער געזונט פון אַ 24-געזונט טעלער איז וועגן 100-300 נג / ול), און די אָפּטימאַל טראַנספעקשאַן געדיכטקייַט פון סעלז איז אַרויף צו 60% -80% אָדער אַזוי

2. די טראַנספעקשאַן סטעפּס און ספּעציפיש רעקווירעמענץ זענען שטרענג אין לויט מיט די ינסטראַקשאַנז.

3. נאָך טראַנספעקשאַן, סאַמפּאַלז קענען זיין געזאמלט ין 24-72 שעה פֿאַר מרנאַ דיטעקשאַן (RT-PCR) אָדער פּראָטעין דיטעקשאַן ין 48-96 שעה (WB)

② רנאַ יקסטראַקשאַן פּראָצעס

1. פאַרהיטן קאַנטאַמאַניישאַן דורך עקסאָגענאָוס ענזימעס.עס דער הויפּט כולל טראָגן מאַסקס און גלאַווז שטרענג;ניצן סטעראַלייזד פּייפּעט עצות און עפּ טובז;די וואַסער געניצט אין דער עקספּערימענט מוזן זיין RNase-Free.

2. עס איז רעקאַמענדיד צו טאָן צוויי מאָל ווי סאַגדזשעסטיד אין די שנעל יקסטראַקשאַן קיט, וואָס וועט טאַקע פֿאַרבעסערן די ריינקייַט און טראָגן.

3. די וויסט פליסיק מוזן נישט פאַרבינדן די רנאַ זייַל.

③ רנאַ קוואַנטיפיקאַטיאָן

נאָך די RNA איז יקסטראַקטיד, עס קענען זיין קוואַנטאַפייד גלייַך מיט Nanodrop, און די מינימום לייענען קענען זיין ווי נידעריק ווי 10ng / ul.

④ פאַרקערט טראַנסקריפּציע פּראָצעס

1. רעכט צו דער הויך סענסיטיוויטי פון RT-qPCR, אין מינדסטער 3 פּאַראַלעל וועלז זאָל זיין געמאכט פֿאַר יעדער מוסטער צו פאַרמייַדן די סאַבסאַקוואַנט קט צו זיין צו אַנדערש אָדער די סד צו זיין צו גרויס פֿאַר סטאַטיסטיש אַנאַליסיס.

2. דו זאלסט נישט פרירן און טאָ האר מישן ריפּיטידלי.

3. יעדער רער / לאָך מוזן זיין ריפּלייסט מיט אַ נייַ שפּיץ!דו זאלסט נישט קאַנטיניואַסלי נוצן די זעלבע פּיפּעטטע שפּיץ צו לייגן סאַמפּאַלז!

4. די פילם אַטאַטשט צו די 96-געזונט טעלער נאָך אַדינג די מוסטער דאַרף זיין סמודד מיט אַ טעלער.עס איז בעסטער צו סענטריפודזש איידער איר שטעלן עס אויף די מאַשין, אַזוי אַז די פליסיק אויף די רער וואַנט קענען לויפן אַראָפּ און באַזייַטיקן לופט באַבאַלז.

⑤ פּראָסט ויסבייג אַנאַליסיס

2.5 וועגן דאַטן אַנאַליסיס

די דאַטן אַנאַליסיס פון qPCR קענען זיין צעטיילט אין קאָרעוו קוואַנטאַפאַקיישאַן און אַבסאָלוט קוואַנטאַפאַקיישאַן.פֿאַר בייַשפּיל, סעלז אין די באַהאַנדלונג גרופּע קאַמפּערד מיט סעלז אין די קאָנטראָל גרופּע,

ווי פילע מאל די מרנאַ פון די X דזשין ענדערונגען, דאָס איז קאָרעוו קוואַנטאַפאַקיישאַן;אין אַ זיכער נומער פון סעלז, די מרנאַ פון די X דזשין

ווי פילע עקזעמפלארן עס זענען, דאָס איז אַבסאָלוט קוואַנטיפיקאַטיאָן.יוזשאַוואַלי וואָס מיר נוצן רובֿ אין דער לאַבאָראַטאָריע איז די קאָרעוו קוואַנטיטאַטיווע אופֿן.געווענליך,די 2-ΔΔקט אופֿןאיז מערסט געניצט אין יקספּעראַמאַנץ, אַזוי בלויז דעם אופֿן וועט זיין באַקענענ אין דעטאַל דאָ.

2-ΔΔct אופֿן: דער רעזולטאַט איז דער חילוק אין דער אויסדרוק פון די ציל דזשין אין די יקספּערמענאַל גרופּע קאָרעוו צו די ציל דזשין אין די קאָנטראָל גרופּע.עס איז פארלאנגט אַז די אַמפּלאַפאַקיישאַן יפעקטיוונאַס פון ביידע די ציל דזשין און די ינערלעך רעפֿערענץ דזשין איז נאָענט צו 100%, און די קאָרעוו דיווייישאַן זאָל נישט יקסיד 5%.

די כעזשבן אופֿן איז ווי גייט:

Δct קאָנטראָל גרופּע = קט ווערט פון ציל דזשין אין קאָנטראָל גרופּע - קט ווערט פון ינערלעך רעפֿערענץ דזשין אין קאָנטראָל גרופּע

Δct יקספּערמענאַל גרופּע = קט ווערט פון די ציל דזשין אין די יקספּערמענאַל גרופּע - קט ווערט פון די ינערלעך רעפֿערענץ דזשין אין די יקספּערמענאַל גרופּע

ΔΔקט=Δקט יקספּערמענאַל גרופּע-Δקט קאָנטראָל גרופּע

צום סוף, רעכענען די קייפל פון חילוק אין אויסדרוק מדרגה:

טוישן פאָלד = 2-ΔΔct (קאָראַספּאַנדינג צו די עקססעל פונקציע איז POWER)

פֿאַרבונדענע פּראָדוקטן:

צעל דירעקט רט-קפּקר קיט