一、 פאַרגרעסערן די סענסיטיוויטי פון די אָפּרוף סיסטעם:

1. יזאָלירן הויך קוואַליטעט רנאַ:

געראָטן cDNA סינטעז קומט פון הויך-קוואַליטעט רנאַ.הויך-קוואַליטעט רנאַ זאָל בייַ מינדסטער זיין פול-לענג און פריי פון פאַרקערט טראַנסקריפּטאַסע ינכיבאַטערז אַזאַ ווי EDTA אָדער SDS.די קוואַליטעט פון רנאַ דיטערמאַנז די מאַקסימום סומע פון ​​סיקוואַנס אינפֿאָרמאַציע איר קענען טראַנסקריבירן אין cDNA.א פּראָסט רנאַ רייניקונג אופֿן איז אַ איין-שריט אופֿן ניצן גואַנידינע יסאָטהיאָסיאַנאַטע / זויער פענאָל.צו פאַרמייַדן קאַנטאַמאַניישאַן דורך שפּור אַמאַונץ פון רנאַסע, רנאַ אפגעזונדערט פון רנאַסע-רייַך סאַמפּאַלז (אַזאַ ווי פּאַנקרעאַס) דאַרף זיין סטאָרד אין פאָרמאַלדאַכייד צו ופהיטן הויך-קוואַליטעט רנאַ, ספּעציעל פֿאַר לאַנג-טערמין סטאָרידזש.די רנאַ יקסטראַקטיד פון שטשור לעבער איז בייסיקלי דיגריידיד נאָך סטאָרד אין וואַסער פֿאַר איין וואָך, בשעת די רנאַ יקסטראַקטיד פון שטשור מילץ איז געווען סטאַביל נאָך סטאָרד אין וואַסער פֿאַר 3 יאָר.אין אַדישאַן, טראַנסקריפּץ מער ווי 4 קב זענען מער שפּירעוודיק צו דערנידעריקונג דורך שפּור רנאַסעס ווי קליין טראַנסקריפּץ.צו פאַרגרעסערן די פעסטקייַט פון סטאָרד רנאַ סאַמפּאַלז, רנאַ קענען זיין צעלאָזן אין דייאָניזעד פאָרמאַמידע און סטאָרד ביי -70 ° סי.פאָרמאַמידע געניצט צו ופהיטן רנאַ מוזן זיין פריי פון רנאַ-דיגריידינג דעבריס.רנאַ פון פּאַנקרעאַס קענען זיין אפגעהיט אין פאָרמאַמידע פֿאַר בייַ מינדסטער איין יאָר.ווען פּריפּערינג צו נוצן רנאַ, איר קענען נוצן די פאלגענדע אופֿן צו אָפּזעצן רנאַ: לייגן NaCl צו 0.2M און 4 מאל די באַנד פון עטאַנאָל, שטעלן אין צימער טעמפּעראַטור פֿאַר 3-5 מינוט און סענטריפודזש ביי 10,000 × ג פֿאַר 5 מינוט.

2. ניצן די RNaseH-ינאַקטיווע (RNaseH-) פאַרקערט טראַנסקריפּציע:

רנאַסע ינכיבאַטערז זענען אָפט מוסיף צו פאַרקערט טראַנסקריפּציע ריאַקשאַנז צו פאַרגרעסערן די לענג און טראָגן פון cDNA סינטעז.רנאַסע ינכיבאַטערז זאָל זיין מוסיף בעשאַס דער ערשטער-שנירל סינטעז אָפּרוף אין דעם בייַזייַן פון אַ באַפער און אַ רידוסינג אַגענט (אַזאַ ווי DTT), ווייַל דער פּראָצעס פריערדיק צו cDNA סינטעז דענאַטשערז די ינכיבאַטער, דערמיט ריליסינג געבונדן רנאַסע וואָס קענען דיגרייד רנאַ.פּראָטעין רנאַסע ינכיבאַטערז בלויז פאַרמייַדן די דערנידעריקונג פון רנאַ דורך רנאַסע א, ב, C, און טאָן ניט פאַרמייַדן רנאַסע אויף די הויט, אַזוי זיין אָפּגעהיט ניט צו באַקענען רנאַסע פון ​​דיין פינגער טראָץ די נוצן פון די ינכיבאַטערז.

פאַרקערט טראַנסקריפּציע קאַטאַליזיז די קאַנווערזשאַן פון רנאַ צו cDNA.ביידע M-MLV און AMV האָבן ענדאָגענאָוס RNaseH טעטיקייט אין אַדישאַן צו זייער אייגענע פּאָלימעראַסע טעטיקייט.RNaseH טעטיקייט און פּאָלימעראַסע טעטיקייט קאָנקורירן מיט יעדער אנדערע פֿאַר די כייבריד שנירל געשאפן צווישן די רנאַ מוסטער און די דנאַ אָנפאַנגער אָדער קדנאַ פאַרלענגערונג שנירל, און דיגרייד די רנאַ שנירל אין די רנאַ: דנאַ קאָמפּלעקס.די רנאַ מוסטער דיגריידיד דורך RNaseH טעטיקייט קענען ניט מער דינען ווי אַ עפעקטיוו סאַבסטרייט פֿאַר cDNA סינטעז, וואָס ראַדוסאַז די טראָגן און לענג פון cDNA סינטעז.דעריבער, עס וואָלט זיין וווילטויק צו עלימינירן אָדער שטארק רעדוצירן די RNaseH טעטיקייט פון פאַרקערט טראַנסקריפּטאַסע.

SuperScript Ⅱ פאַרקערט טראַנסקריפּציע, RNaseH-MMLV פאַרקערט טראַנסקריפּציע און טערמאָוסקריפּט פאַרקערט טראַנסקריפּטאַסע, RNaseH-AMV, קענען באַקומען מער סומע און מער פול-לענג קדנאַ ווי MMLV און AMV.RT-PCR סענסיטיוויטי וועט זיין אַפעקטאַד דורך די סומע פון ​​​​קדנאַ סינטעז.ThermoScript איז פיל מער שפּירעוודיק ווי AMV.די גרייס פון RT-PCR פּראָדוקטן איז לימיטעד דורך די פיייקייט פון פאַרקערט טראַנסקריפּטאַסע צו סינטאַסייז קדנאַ, ספּעציעל ווען קלאָונינג גרעסערע קדנאַ.קאַמפּערד מיט MMLV, SuperScripⅡ באטייטיק געוואקסן די טראָגן פון לאַנג RT-PCR פּראָדוקטן.די RNaseH-פאַרקערט טראַנסקריפּטאַסע אויך האט געוואקסן טערמאַסטאַביליטי, אַזוי דער אָפּרוף קענען זיין דורכגעקאָכט ביי טעמפּעראַטורעס העכער ווי נאָרמאַל 37-42 °C.אונטער די סאַגדזשעסטיד סינטעז טנאָים, נוצן אָליגאָ (דט) אָנפאַנגער און 10 μCi פון [α-P] dCTP.די גאַנץ טראָגן פון ערשטער שנירל איז קאַלקיאַלייטיד מיט די טקאַ אָפּזאַץ אופֿן.פול-לענג cDNA איז אַנאַלייזד ניצן גרייס-סאָרטיד באַנדס עקססייזד און גערעכנט אויף אַ אַלקאַליין אַגאַראָסע געל.

3. כאַפּן די ינגקיוביישאַן טעמפּעראַטור פֿאַר פאַרקערט טראַנסקריפּציע:

א העכער ינגקיוביישאַן טעמפּעראַטור העלפּס צו עפֿענען די רנאַ צווייטיק סטרוקטור, ינקריסינג די טראָגן פון דער אָפּרוף.פֿאַר רובֿ רנאַ טעמפּלאַטעס, ינקובאַטינג די רנאַ און אָנפאַנגער ביי 65 ° C אָן באַפער אָדער זאַלץ, נאכגעגאנגען דורך גיך קאָאָלינג אויף אייז וועט עלימינירן רובֿ צווייטיק סטראַקטשערז און לאָזן אָנפאַנגער צו בינדן.אָבער, עטלעכע טעמפּלאַטעס נאָך האָבן צווייטיק סטראַקטשערז, אפילו נאָך היץ דינאַטיישאַן.אַמפּלאַפאַקיישאַן פון די שווער טעמפּלאַטעס קענען זיין דורכגעקאָכט מיט ThermoScript Reverse Transcriptase און שטעלן די פאַרקערט טראַנסקריפּציע אָפּרוף אין אַ העכער טעמפּעראַטור צו פֿאַרבעסערן אַמפּלאַפאַקיישאַן.העכער ינגקיוביישאַן טעמפּעראַטורעס קענען אויך פאַרגרעסערן ספּעסיפיקאַטי, ספּעציעל ווען דזשין-ספּעציפיש פּרימערז (גספּ) זענען געניצט פֿאַר קדנאַ סינטעז (זען טשאַפּטער 3).אויב איר נוצן GSP, ענשור אַז די טם פון די אָנפאַנגער איז די זעלבע ווי די דערוואַרט ינגקיוביישאַן טעמפּעראַטור.דו זאלסט נישט נוצן אָליגאָ (דט) און ראַנדאָם פּרימערז העכער 60 ° C.ראַנדאָם פּרימערז דאַרפן ינגקיוביישאַן ביי 25 ° C פֿאַר 10 מינוט איידער ינקריסינג צו 60 ° C.אין אַדישאַן צו נוצן אַ העכער פאַרקערט טראַנסקריפּציע טעמפּעראַטור, ספּעסיפיקייט קענען אויך זיין ימפּרוווד דורך גלייַך טראַנספערינג די רנאַ / אָנפאַנגער מישן פון די 65 ° C דענאַטוראַטיאָן טעמפּעראַטור צו די פאַרקערט טראַנסקריפּציע ינגקיוביישאַן טעמפּעראַטור און אַדינג אַ פאַר-וואָרמד 2 × אָפּרוף געמיש (cDNA הייס-אָנהייב סינטעז).דעם צוגאַנג העלפט פאַרמייַדן די ינטערמאָלעקולאַר באַזע פּערינג וואָס אַקערז ביי נידעריקער טעמפּעראַטורעס.די קייפל טעמפּעראַטור סוויטשינג פארלאנגט פֿאַר RT-PCR קענען זיין סימפּלאַפייד דורך ניצן אַ טערמאַל סייקאַלער.

טטה טערמאָסטאַבלע פּאָלימעראַסע אקטן ווי אַ דנאַ פּאָלימעראַסע אין דעם בייַזייַן פון Mg2+ און ווי אַ רנאַ פּאָלימעראַסע אין דעם בייַזייַן פון Mn2+.עס קענען זיין וואַרעם אין אַ מאַקסימום טעמפּעראַטור פון 65 ℃.אָבער, די בייַזייַן פון Mn2+ בעשאַס פּקר ראַדוסאַז פאַדעלאַטי, וואָס מאכט טה פּאָלימעראַסע ווייניקער פּאַסיק פֿאַר הויך-פּינטלעכקייַט אַמפּלאַפאַקיישאַן, אַזאַ ווי קלאָונינג פון קדנאַ.אין אַדישאַן, Tth האט נידעריק פאַרקערט טראַנסקריפּציע עפעקטיווקייַט, וואָס ראַדוסאַז סענסיטיוויטי, און זינט פאַרקערט טראַנסקריפּציע און פּקר קענען זיין דורכגעקאָכט מיט אַ איין ענזיים, קאָנטראָל ריאַקשאַנז אָן פאַרקערט טראַנסקריפּציע קענען ניט זיין געוויינט צו פאַרגלייַכן cDNA אַמפּלאַפאַקיישאַן פּראָדוקטן מיט קאַנטאַמאַנייטינג גענאָמיק דנאַ.די אַמפּלאַפאַקיישאַן פּראָדוקטן זענען אפגעשיידט.

4. אַדאַטיווז וואָס העכערן פאַרקערט טראַנסקריפּציע:

אַדאַטיווז אַרייַנגערעכנט גליסעראָל און דמסאָ זענען מוסיף צו דער ערשטער-שנירל סינטעז אָפּרוף, וואָס קענען רעדוצירן די פעסטקייַט פון די נוקלעיק זויער טאָפּל-שנירל און אַנטייד די צווייטיק סטרוקטור פון רנאַ.אַרויף צו 20% גליסעראָל אָדער 10% DMSO קענען זיין מוסיף אָן אַפעקטינג SuperScript II אָדער MMLV טעטיקייט.AMV קענען אויך דערלאָזן אַרויף צו 20% גליסעראָל אָן אָנווער פון טעטיקייט.אין סדר צו מאַקסאַמייז די סענסיטיוויטי פון RT-PCR אין די SuperScriptⅡ פאַרקערט טראַנסקריפּציע אָפּרוף, 10% גליסעראָל קענען זיין מוסיף און ינקובייטיד ביי 45 °C.אויב 1/10 פון די פאַרקערט טראַנסקריפּציע אָפּרוף פּראָדוקט איז מוסיף צו פּקר, די קאַנסאַנטריישאַן פון גליסעראָל אין די אַמפּלאַפאַקיישאַן אָפּרוף איז 0.4%, וואָס איז נישט גענוג צו ינכיבאַט פּקר.

5. RNaseH מייַכל:

באַהאַנדלונג פון קדנאַ סינטעז ריאַקשאַנז מיט רנאַסעה איידער פּקר קענען פאַרגרעסערן סענסיטיוויטי.פֿאַר עטלעכע טעמפּלאַטעס, עס איז געדאַנק אַז רנאַ אין די cDNA סינטעז אָפּרוף פּריווענץ די ביינדינג פון אַמפּלאַפאַקיישאַן פּראָדוקטן, אין וואָס פאַל RNaseH באַהאַנדלונג קענען פאַרגרעסערן סענסיטיוויטי.אין אַלגעמיין, RNaseH באַהאַנדלונג איז נייטיק ווען אַמפּלאַפייינג מער פול-לענג קדנאַ ציל טעמפּלאַטעס, אַזאַ ווי נידעריק-קאָפּיע טובעראָוס סטשעראָסיס וו.פֿאַר דעם שווער מוסטער, RNaseH באַהאַנדלונג ענכאַנסט די סיגנאַל געשאפן דורך SuperScript II אָדער AMV-סינטאַסייזד קדנאַ.פֿאַר רובֿ RT-PCR ריאַקשאַנז, RNaseH באַהאַנדלונג איז אַפּשאַנאַל, ווייַל די PCR דינאַטוראַטיאָן שריט ביי 95 ° C בכלל כיידראַליזיז די רנאַ אין די רנאַ: דנאַ קאָמפּלעקס.

6. פֿאַרבעסערונג פון קליין רנאַ דיטעקשאַן מעטאַד:

RT-PCR איז ספּעציעל טשאַלאַנדזשינג ווען בלויז קליין אַמאַונץ פון רנאַ זענען בנימצא.גלייקאַדזשין צוגעגעבן ווי אַ טרעגער בעשאַס רנאַ אפגעזונדערטקייט העלפּס צו פאַרגרעסערן די טראָגן פון קליין סאַמפּאַלז.RNase-פֿרייַ גלייקאַדזשין קענען זיין מוסיף אין דער זעלביקער צייט ווי אַדינג טריזאָל.גלייקאַדזשין איז וואַסער סאַליאַבאַל און קענען זיין געהאלטן אין די ייקוויאַס פאַסע מיט רנאַ צו העלפן סאַבסאַקוואַנט אָפּזאַץ.פֿאַר סאַמפּאַלז ווייניקער ווי 50 מג פון געוועב אָדער 106 קאַלטשערד סעלז, די רעקאַמענדיד קאַנסאַנטריישאַן פון רנאַסע-פריי גלייקאַדזשין איז 250 μג / מל.

אַדינג אַסעטילאַטעד BSA צו די פאַרקערט טראַנסקריפּציע אָפּרוף ניצן SuperScript II קענען פאַרגרעסערן די סענסיטיוויטי, און פֿאַר קליין אַמאַונץ פון RNA, רידוסינג די סומע פון ​​SuperScript II און אַדינג 40 וניץ פון RNaseOut נוקלעאַסע ינכיבאַטער קענען פאַרגרעסערן די דיטעקשאַן מדרגה.אויב גלייקאַדזשין איז געניצט אין די RNA אפגעזונדערטקייט פּראָצעס, עס איז נאָך רעקאַמענדיד צו לייגן BSA אָדער RNase ינכיבאַטער ווען ניצן SuperScript II פֿאַר פאַרקערט טראַנסקריפּציע אָפּרוף.

למשל, פאַרגרעסערן RT-PCR ספּעסיפיקאַטי

1. CND אַסינטעז:

ערשטער-שנירל קדנאַ סינטעז קענען זיין ינישיייטיד מיט דריי פאַרשידענע מעטהאָדס, די קאָרעוו ספּעציפֿיטעט פון וואָס אַפעקץ די סומע און טיפּ פון קדנאַ סינטאַסייזד.

די ראַנדאָם אָנפאַנגער אופֿן איז געווען דער קלענסטער ספּעציפיש פון די דריי מעטהאָדס.פּרימערז אַנייל בייַ קייפל זייטלעך איבער די טראַנסקריפּט, דזשענערייטינג קורץ, טייל-לענג cDNAs.דער אופֿן איז אָפט געניצט צו קריגן 5′ סוף סיקוואַנסיז און צו קריגן קדנאַ פון רנאַ טעמפּלאַטעס מיט מקומות פון צווייטיק סטרוקטור אָדער מיט טערמאַניישאַן זייטלעך וואָס קענען ניט זיין רעפּליקייטיד דורך פאַרקערט טראַנסקריפּטאַסע.צו באַקומען די לאָנגעסט cDNA, די פאַרהעלטעניש פון אָנפאַנגער צו רנאַ אין יעדער רנאַ מוסטער דאַרף זיין עמפּיריקלי באשלאסן.די סטאַרטינג קאַנסאַנטריישאַן פון ראַנדאָם פּרימערז ריינדזשד פון 50 צו 250 נג פּער 20 μל אָפּרוף.זינט cDNA סינטאַסייזד פֿון גאַנץ רנאַ ניצן טראַפ - פּרימערז איז בפֿרט ריבאָסאָמאַל רנאַ, פּאָלי (א) + רנאַ איז בכלל אויסדערוויילט ווי די מוסטער.

אָליגאָ (דט) פּרימערז זענען מער ספּעציפיש ווי טראַפ - פּרימערז.עס כייברידיזיז צו די פּאָלי (א) עק געפֿונען אין די 3′ סוף פון רובֿ עוקאַריאָטיק מרנאַס.ווייַל פּאָלי (א) + רנאַ איז בעערעך 1% צו 2% פון גאַנץ רנאַ, די סומע און קאַמפּלעקסיטי פון קדנאַ איז פיל ווייניקער ווי מיט טראַפ - פּרימערז.ווייַל פון זייַן הויך ספּעסיפיקאַטי, אָליגאָ (דט) בכלל טוט נישט דאַרפן אַפּטאַמאַזיישאַן פון די פאַרהעלטעניש פון רנאַ צו פּרימערז און פּאָלי (א) + סעלעקציע.עס איז רעקאַמענדיד צו נוצן 0.5μג אָליגאָ (דט) פּער 20μל אָפּרוף סיסטעם.oligo(dT)12-18 איז פּאַסיק פֿאַר רובֿ RT-PCR.די ThermoScript RT-PCR סיסטעם אָפפערס אָליגאָ (דט) 20 ווייַל פון זיין בעסער טערמאַל פעסטקייַט פֿאַר העכער ינגקיוביישאַן טעמפּעראַטורעס.

גענע ספּעציפיש פּרימערז (GSP) זענען די מערסט ספּעציפיש אָנפאַנגער פֿאַר די פאַרקערט טראַנסקריפּציע שריט.GSP איז אַן אַנטיסענס אָליגאָנוקלעאָטידע וואָס קענען ספּאַסיפיקלי כייברידיזירן צו די רנאַ ציל סיקוואַנס, ניט ענלעך ראַנדאָם אָנפאַנגערס אָדער אָליגאָ (דט), וואָס אַנאַלייז צו אַלע רנאַ.די זעלבע כּללים געניצט צו פּלאַן פּקר אָנפאַנגער אַפּלייז צו די פּלאַן פון GSP אין פאַרקערט טראַנסקריפּציע ריאַקשאַנז.די GSP קענען זיין די זעלבע סיקוואַנס ווי די אַמפּלאַפאַקיישאַן אָנפאַנגער וואָס אַניאַלז צו די 3′-מערסט סוף פון די מרנאַ, אָדער די GSP קענען זיין דיזיינד צו אַנאַלייז דאַונסטרים פון די פאַרקערט אַמפּלאַפאַקיישאַן אָנפאַנגער.פֿאַר עטלעכע אַמפּלאַפייד סאַבדזשעקץ, מער ווי איין אַנטיסענסע אָנפאַנגער דאַרף זיין דיזיינד פֿאַר מצליח RT-PCR ווייַל די צווייטיק סטרוקטור פון די ציל רנאַ קען פאַרמייַדן אָנפאַנגער ביינדינג.עס איז רעקאַמענדיד צו נוצן 1 פּמאָל אַנטיסענסע גספּ אין אַ 20 μל ערשטער-שנירל סינטעז אָפּרוף.

2. כאַפּן די ינגקיוביישאַן טעמפּעראַטור פֿאַר פאַרקערט טראַנסקריפּציע:

אין סדר צו נוצן די פול מייַלע פון ​​​​GSP ספּעציפֿישקייט, אַ פאַרקערט טראַנסקריפּציע מיט העכער טערמאַסטאַביליטי זאָל זיין געוויינט.טערמאָסטאַבלע פאַרקערט טראַנסקריפּטאַסאַז קענען זיין ינקובייטיד אין העכער טעמפּעראַטורעס צו פאַרגרעסערן אָפּרוף סטרינדזשאַנסי.פֿאַר בייַשפּיל, אויב אַ GSP אַנאַליזעס ביי 55 ° C, די ספּעסיפיקייט פון די GSP וועט נישט זיין גאָר יוטאַלייזד אויב AMV אָדער M-MLV איז געניצט פֿאַר פאַרקערט טראַנסקריפּציע אין אַ נידעריק סטרינדזשאַנסי פון 37 ° C.אָבער, SuperScript II און ThermoScript קענען זיין ריאַקטאַד ביי 50 ° C אָדער העכער, וואָס וועט עלימינירן ניט-ספּעציפיש פּראָדוקטן דזשענערייטאַד ביי נידעריקער טעמפּעראַטורעס.פֿאַר מאַקסימום ספּעציפֿישקייט, די רנאַ / אָנפאַנגער מישן קענען זיין טראַנספערד גלייַך פון די 65 ° C דענאַטוראַטיאָן טעמפּעראַטור צו די פאַרקערט טראַנסקריפּציע ינגקיוביישאַן טעמפּעראַטור און צוגעגעבן צו אַ פאַר-וואָרמד 2 × אָפּרוף מישן (קדנאַ סינטעז הייס אָנהייב).דאָס העלפּס צו פאַרמייַדן ינטערמאָלעקולאַר באַזע פּערינג ביי נידעריק טעמפּעראַטורעס.די קייפל טעמפּעראַטור טראַנזישאַנז פארלאנגט פֿאַר RT-PCR קענען זיין סימפּלאַפייד דורך ניצן אַ טערמאַל סייקאַלער.

3. ראַדוסאַז גענאָמיק דנאַ קאַנטאַמאַניישאַן:

א פּאָטענציעל שוועריקייט געפּלאָנטערט מיט RT-PCR איז די קאַנטאַמאַניישאַן פון גענאָמיק דנאַ אין די רנאַ.ניצן אַ גוט רנאַ אפגעזונדערטקייט אופֿן, אַזאַ ווי טריזאָל רעאַגענט, וועט רעדוצירן די סומע פון ​​גענאָמיק דנאַ קאַנטאַמאַנייטינג די רנאַ צוגרייטונג.צו ויסמיידן פּראָדוקטן דערייווד פון גענאָמיק דנאַ, רנאַ קענען זיין באהאנדלט מיט אַמפּלאַפאַקיישאַן-מיינונג דנאַסע איך צו באַזייַטיקן קאַנטאַמאַנייטינג דנאַ איידער פאַרקערט טראַנסקריפּציע.די דיידזשעסטשאַן פון דנאַסע איך איז געווען טערמאַנייטיד דורך ינקובאַטינג די סאַמפּאַלז אין 2.0 מם עדטאַ פֿאַר 10 מינוט ביי 65 ° C.עדטאַ קענען טשעלירן מאַגניזיאַם ייאַנז, פּרעווענטינג מאַגניזיאַם יאָן-אָפענגיק רנאַ כיידראַלאַסאַס ביי הויך טעמפּעראַטורעס.

אין סדר צו צעטיילן אַמפּלאַפייד cDNA פון קאַנטאַמאַנייטינג גענאָמיק דנאַ אַמפּלאַפאַקיישאַן פּראָדוקטן, פּריימערז קענען זיין דיזיינד אַז יעדער אַניאַל צו באַזונדער עקסאָנס.פּקר פּראָדוקטן דערייווד פון cDNA וועט זיין קירצער ווי די דערייווד פון קאַנטאַמאַנייטאַד גענאָמיק דנאַ.אין אַדישאַן, אַ קאָנטראָל עקספּערימענט אָן פאַרקערט טראַנסקריפּציע איז דורכגעקאָכט אויף יעדער רנאַ מוסטער צו באַשליסן צי אַ געגעבן פראַגמענט איז דערייווד פון גענאָמיק דנאַ אָדער קדנאַ.די פּקר פּראָדוקט באקומען אָן פאַרקערט טראַנסקריפּציע איז דערייווד פון די גענאָמע.