PCR, קייפל PCR, אין סיטו PCR, פאַרקערט PCR, רט-פּקר, qPCR (1)—PCR

מיר וועלן סאָרט אויס די קאַנסעפּס, סטעפּס און דעטאַילס פון פאַרשידן PCR

Ⅰ. PCR

פּאָלימעראַסע קייט רעאַקטיאָן, ריפערד צו ווי פּקר, איז אַ מאָלעקולאַר בייאַלאַדזשיקאַל טעכנאָלאָגיע וואָס איז געניצט צו פאַרגרעסערן ספּעציפיש דנאַ פראַגמאַנץ.עס קענען זיין גערעכנט ווי אַ ספּעציעל דנאַ רעפּלאַקיישאַן אין וויטראָ.דנאַ פּאָלימעראַסע (DNA Polymerase I) איז געווען דיסקאַווערד אין 1955, און Klenow Fragment of E. Coli, וואָס האט יקספּערמענאַל ווערט און פּראַקטיקאַלאַטי, איז דיסקאַווערד דורך דר.די ענזימעס אין נוצן היינט (גערופן טאק פאלימעראזע), זענען אפגעזונדערט געווארן פון טערמוס אקוואטיקוס, א הייסע פרילינג באקטעריע אין 1976. זיין כאראקטעריסטיק איז אז עס קען זיך אנטקעגן הויך טעמפעראטור און איז אן אידעאל ענזיים, אבער עס ווערט ברייט גענוצט נאך די 1980ער יארן.דער אָריגינעל באַגריף פון דער אָריגינעל פּרימיטיוו פּראָוטאַטייפּ פון פּקר איז ענלעך צו דזשין פאַרריכטן און קאַפּיינג, וואָס איז געווען פארגעלייגט דורך ד"ר KJell Kleppe אין 1971. ער ארויס די ערשטער פּשוט און קורץ-טערמין דזשין קאָפּיע (ענלעך צו די ערשטער צוויי ציקל ריאַקשאַנז פון פּקר).די PCR דעוועלאָפּעד הייַנט איז דעוועלאָפּעד דורך ד"ר קאַרי ב. מוליס אין 1983. ד"ר מוליס געדינט פּע קאָמפּאַניעס אַז יאָר, אַזוי פּע האט אַ ספּעציעל סטאַטוס אין די פּקר אינדוסטריע.ד"ר מוליס האָט אפיציעל פארעפנטלעכט די ערשטע שייַכות צייטונג מיט סאַיקי און אנדערע אין 1985. זינט דעמאָלט, די נוצן פון PCR איז טויזנטער פון מייל אַ טאָג, און די קוואַליטעט פון פֿאַרבונדענע צייטונגען קענען זיין געזאָגט צו מאַכן פילע אנדערע פאָרשונג מעטהאָדס אַנפּאַלאַטאַבאַל.דערנאָך, PCR טעכנאָלאָגיע איז וויידלי געניצט אין בייאַלאַדזשיקאַל וויסנשאפטלעכע פאָרשונג און קליניש אַפּלאַקיישאַנז, און איז די מערסט וויכטיק טעכנאָלאָגיע פון ​​מאָלעקולאַר ביאָלאָגי פאָרשונג.Mullis אויך וואַן די 1993 נאָבעל פרייז אין כעמיע.

PCRפּרינציפּ

די גרונט פּרינציפּ פון פּקר טעכנאָלאָגיע איז ענלעך צו די נאַטירלעך רעפּלאַקיישאַן פּראָצעס פון דנאַ, און זייַן ספּעסיפיסיטי דעפּענדס אויף די אָליגאָנוקלעאָטידע אָנפאַנגער וואָס איז קאַמפּלאַמענטשי צו ביידע ענדס פון די ציל סיקוואַנס.PCR איז פארפאסט פון דידזשענעריישאַן-ניילינג-פאַרלענגערונג דריי יקערדיק ריאַקשאַנז סטעפּס: ① דידזשענעריישאַן פון טעמפּלאַטע דנאַ: נאָך די מוסטער דנאַ איז העאַטעד צו וועגן 93°C פֿאַר אַ זיכער צייט, די צווייענדיק דנאַ לייזונג פֿאַר די צווייענדיק-קייט דנאַ געשאפן דורך די פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן פון די מוסטער דנאַ לאָזן, מאַכן עס אַ איין קייט צו צוגרייטן פֿאַר די ווייַטער פּרימער אָפּרוף צו צוגרייטן.② די אַנילינג (קאָמפּאָנענט) פון די מוסטער דנאַ און די אָנפאַנגער: נאָך די מוסטער דנאַ איז העאַטעד און דידזשענערייטיד אין אַ איין קייט, די טעמפּעראַטור טראפנס צו וועגן 55 ° C.די קאַמפּלאַמענטשי סיקוואַנס פון די אָנפאַנגער און די מוסטער דנאַ איין-קייט.③ די פאַרלענגערונג פון די אָנפאַנגער: דנאַ מוסטער - דער אָנפאַנגער ביינדינג איז באזירט אויף דער קאַמף פון טאַקדנאַ פּאָלימעראַסע, מיט דנטפּ ווי דער אָפּרוף רוי מאַטעריאַל.האַלטן דעם פּרינציפּ פון רעפּלאַקיישאַן, סינטאַסייז אַ נייַע האַלב-רעזערווירט קאָפּיע קייט וואָס דערגאַנג די מוסטער דנאַ קייט, און איבערחזרן ציקל דידזשענעריישאַן-אַנניאַלינג-פאַרלענגערונג דריי פּראַסעסאַז קענען באַקומען מער "האַלב-רעזערווירט קאָפּיע קייט", און די נייַע קייט איז בארעכטיגט ווידער ווערן אַ מוסטער פֿאַר דער ווייַטער ציקל.עס נעמט 2-4 מינוט צו פאַרענדיקן די שלייף, די ציל דזשין קענען זיין אַמפּלאַפייד עטלעכע מיליאָן מאל אין 2-3 שעה.

נאָרמאַלPCRרעאַקציע סיסטעם

פינף עלעמענטן פון פּקר אָפּרוף

עס זענען דער הויפּט פינף מינים פון סאַבסטאַנסיז ינוואַלווד אין פּקר אָפּרוף, ניימלי אָנפאַנגער, ענזיים, דנטפּ, מוסטער און באַפער (מג2+ איז פארלאנגט).[PCR פּראָצעדור]

דער נאָרמאַל פּקר פּראָצעס איז צעטיילט אין דרייַ סטעפּס

1. דנאַ דידזשענעריישאַן (90 ° C-96 ° C): צווייענדיק-קייט דנאַ טעמפּלאַטעס אונטער טערמאַל קאַמף, הידראָגען קייטן ברעכן, פאָרמינג אַ איין-קייט דנאַ.

2. אַנילינג (25 ℃ -65 ℃): די סיסטעם טעמפּעראַטור איז רידוסט, די אָנפאַנגער איז קאַמביינד מיט די דנאַ מוסטער צו פאָרעם אַ היגע צווייענדיק קייט.

3. פאַרלענגערונג (70 ℃ -75 ℃): אונטער דער קאַמף פון טאַק ענזיים (וועגן 72 ° C, דער בעסטער טעטיקייט), דנטפּ איז געניצט ווי די רוי מאַטעריאַל, פאַרברייטערן פון די 5′ סוף פון די אָנפאַנגער → 3′ סוף, סינטעז און מוסטער דערגאַנג יעדער אנדערע דנאַ קייט.

יעדער ציקל איז דענאַטורעד, אַנניילד און עקסטענדעד, דאַבלינג די דנאַ אינהאַלט.דערווייַל, רעכט צו דער קורץ אַמפּלאַפאַקיישאַן געגנט, עטלעכע פּקר קענען זיין רעפּליקייטיד אין אַ זייער קורץ צייט אפילו אויב די Taq ענזיים טעטיקייט איז נישט אָפּטימאַל, אַזוי עס קענען זיין טשיינדזשד צו צוויי סטעפּס, דאָס איז, די אַנילינג און פאַרלענגערונג קענען זיין דורכגעקאָכט ביי 60 ° C-65 ° C אין דער זעלביקער צייט.אין סדר צו רעדוצירן דעם פּראָצעס פון ליפטינג און קאָאָלינג און פֿאַרבעסערן די ענטפער גיכקייַט.

פּקר רעאַקטיאָן פֿעיִקייטן

● הויך-ספּעציפישיטי

די ספּעציפיש באַשטימענדיק סיבות פון די פּקר ענטפער זענען: ①די ספּעציפיש קאָמבינאַציע פון ​​די אָנפאַנגער און די מוסטער דנאַ.② דער פּרינציפּ פון באַזע פּערינג.③ די לויאַלטי פון די TaqDNA פּאָלימעראַסע סינטעז אָפּרוף.④ די ספּעציפֿישקייט און קאָנסערוואַטיווענעסס פון די ציל דזשין.

די ריכטיק קאָמבינאַציע פון ​​פּרימערז און טעמפּלאַטעס איז דער שליסל.די ביינדינג פון די אָנפאַנגער און די מוסטער און די פאַרלענגערונג פון די אָנפאַנגער קייט זענען באזירט אויף דעם פּרינציפּ פון אַלקאַליין באַזע וואָס ריכטן זיך.די לויאַלטי פון ריאַקשאַנז פון פּאָלימעראַסע סינטעז און די הויך טעמפּעראַטור קעגנשטעל פון די טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע צו מאַכן די ביינדינג (קאָמפּאָנענט) פון די מוסטער און אָנפאַנגער אין דער אָפּרוף קענען זיין דורכגעקאָכט אין אַ העכער טעמפּעראַטור.די ספּעציפישקייט פון די קאָמבינאַציע איז זייער געוואקסן.דער קלעמערל קענען האַלטן אַ הויך גראַד פון ריכטיק.דורך סאַלעקטינג אַ ציל גענעטיק געגנט מיט הויך קאָנסערוואַטיווענעסס און הויך קאָנסערוואַטיווענעסס, זייַן ספּעסיפיסיטי איז העכער.

● הויך סענסיטיוויטי

די פּראָדוקציע באַנד פון פּקר פּראָדוקטן איז געוואקסן דורך אינדעקס, וואָס קענען יקספּאַנד די סטאַרטינג מוסטער פון פּיקקער (פּג = 10-12) צו פאַרגרעסערן די מדרגה פון מיקראָקאָנטראָללער צו די מדרגה פון מייקראָוגראַמז (μg = -6).א ציל סעלז קענען זיין דיטעקטאַד פֿון 1 מיליאָן סעלז;אין די דיטעקשאַן פון ווירוסעס, די סענסיטיוויטי פון פּקר קענען דערגרייכן 3 RFUs (ליידיק ספּאַץ געשאפן וניץ);די מינימום דיטעקשאַן קורס אין באַקטיריאַל וויסנשאַפֿט איז 3 באַקטיריאַ.

● פּשוט און שנעל

די פּקר אָפּשפּיגלונג ניצט אַ הויך-טעמפּעראַטור טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע, וואָס מוסיף די אָפּרוף לייזונג אין איין מאָל, דאָס איז, אַ דידזשענעריישאַן-אַנניאַל-פאַרלענגערונג אָפּרוף אויף די דנאַ אַמפּלאַפאַקיישאַן לייזונג און וואַסער וואַנע טאָפּ.אין אַלגעמיין, די אַמפּלאַפאַקיישאַן אָפּרוף איז געענדיקט אין 2-4 שעה.אַגמענטעד פּראָדוקטן זענען בכלל אַנאַלייזד דורך עלעקטריקאַל שווערד, און טאָן ניט האָבן צו נוצן יסאָטאָפּעס, קיין ראַדיאָאַקטיוו פאַרפּעסטיקונג און גרינג העכערונג.

● די ריינקייַט פון די ספּעסאַמאַן איז נידעריק

עס איז ניט דאַרפֿן צו באַזונדער ווירוסעס אָדער באַקטיריאַ און קולטור סעלז.דנאַ גראָב פּראָדוקטן און רנאַ קענען זיין געוויינט ווי אַמפּלאַפייערז.דנאַ אַמפּלאַפאַקיישאַן דיטעקשאַן קענען זיין געוויינט גלייַך מיט קליניש ספּעסאַמאַנז אַזאַ ווי בלוט, גוף פליסיק, הוסט וואַשינג פליסיק, האָר, סעלז און לעבעדיק געוועב.

PCRפּראָסט פּראָבלעמס

● פאַלש נעגאַטיוו, קיין אַמפּלאַפייד באַנדס

די הויפּט סטאַגעס פון די פּקר אָפּרוף אַרייַננעמען: ① צוגרייטונג פון מוסטער נוקלעיק אַסאַדז, ② קוואַליטעט און ספּעציפֿישקייט פון אָנפאַנגער, ③ די קוואַליטעט פון ענזימעס ④ פּקר ציקל טנאָים.געפֿינען די סיבה זאָל אויך זיין אַנאַלייזד און געלערנט פֿאַר די אויבן לינקס.

טעמפּלאַטעס: ① דער מוסטער כּולל פאַרשידן פּראָטעין, ② דער מוסטער כּולל אַ טאַק ענזיים ינכיבאַטער, ③ דער פּראָטעין אין די מוסטער איז נישט ילימאַנייטאַד, ספּעציעל די גרופּע פּראָטעין אין די כראָמאָסאָם.⑤ דעמינער נוקלעיק זויער דידזשענעריישאַן איז נישט גרונטיק.ווען די קוואַליטעט פון ענזימעס און פּרימערז זענען גוט, עס איז קיין אַמפּלאַפאַקיישאַן באַנד, וואָס איז רובֿ מסתּמא די דיגעסטיווע באַהאַנדלונג פון ספּעסאַמאַנז.עס איז עפּעס פאַלש מיט דעם מוסטער נוקלעיק זויער יקסטראַקשאַן פּראָצעס, אַזוי צו צוגרייטן אַ עפעקטיוו און סטאַביל דיידזשעסטשאַן לייזונג, זייַן פּראָצעדור זאָל זיין פאַרפעסטיקט און נישט אַרביטרעראַלי געביטן.

ענזיים ינאַקטיוויישאַן: אַ נייַ ענזיים אָדער ביידע אַלט און נייַ ענזימעס זאָל זיין געוויינט צוזאַמען צו פונאַנדערקלייַבן צי די ענזיים טעטיקייט איז פאַרפאַלן אָדער ניט גענוגיק, וואָס פירן צו פאַלש נעגאַטיווע.עס זאָל זיין אנגעוויזן אַז טאַק ענזיים אָדער עטהידיום בראָומייד איז מאל פארגעסן.

אָנפאַנגער: די קוואַליטעט פון די אָנפאַנגער, די קאַנסאַנטריישאַן פון די אָנפאַנגער, און צי די קאַנסאַנטריישאַן פון די צוויי אָנפאַנגער איז סאַמעטריקאַל.עס איז אַ פּראָסט סיבה פֿאַר די פּקר דורכפאַל אָדער די ינקריסינג באַנד איז נישט ידעאַל און פּראָנע צו דיפיוז.עס זענען פּראָבלעמס מיט די קוואַליטעט פון די אָנפאַנגער פון עטלעכע פּעקל נומערן.די צוויי פּרימערז האָבן אַ הויך קאַנסאַנטריישאַן און אַ נידעריק קאַנסאַנטריישאַן, וואָס פאַרשאַפן נידעריק עפעקטיווקייַט אַסיממעטריק אַמפּלאַפאַקיישאַן.די קאַונטערמעזשערז זענען: ① אויסקלייַבן אַ גוט אָנפאַנגער צו סינטאַסייז וניץ.② די קאַנסאַנטריישאַן פון די אָנפאַנגער דעפּענדס ניט בלויז אויף די אָד ווערט, אָבער אויך באַצאָלן ופמערקזאַמקייט צו דער אָריגינעל פליסיק פון די אָנפאַנגער צו מאַכן אַגאַר צוקער געל עלעקטראָפאָרעסיס.עס מוזן זיין אַ אָנפאַנגער פּאַס זאָנע, און די ברייטנאַס פון די צוויי אָנפאַנגער זאָל זיין בכלל קאָנסיסטענט.גאַרטל, PCR קען דורכפאַל אין דעם צייט, און עס זאָל זיין ריזאַלווד מיט די אָנפאַנגער סינטעז אַפּאַראַט.אויב אַ אָנפאַנגער איז הויך, די ברייטנאַס איז נידעריק, און זייַן קאַנסאַנטריישאַן מוזן זיין באַלאַנסט ווען דיילוטאַד.③ די אָנפאַנגער זאָל זיין באַצאָלט און סטאָרד אין אַ הויך קאַנסאַנטריישאַן צו פאַרמייַדן קייפל ייַז קאַלט אָדער לאַנג-טערמין ריפרידזשעריישאַן טיילן פון די פרידזשידער, וואָס וועט פאַרשאַפן די אָנפאַנגער צו פאַרערגערן און דיגרייד.④ דער פּלאַן פון די אָנפאַנגער איז קרום, אַזאַ ווי די לענג פון די אָנפאַנגער איז ניט גענוגיק, און די די קנויל איז געשאפן צווישן די אָנפאַנגער.

Mg2 + קאַנסאַנטריישאַן: Mg2 + יאָן קאַנסאַנטריישאַן האט אַ גרויס פּראַל אויף פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן עפעקטיווקייַט.יבעריק קאַנסאַנטריישאַן קענען רעדוצירן די פאַרקערט געשלעכט פון פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן.אויב די קאַנסאַנטריישאַן איז צו נידעריק, די פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן רעזולטאַט וועט אפילו מאַכן די פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן דורכפאַל אָן די יקספּאַנשאַן באַנד.

ענדערונג פון אָפּרוף באַנד: דער באַנד געניצט אין פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן איז 20ul, 30ul, און 50ul אָדער 100ul, די גרויס באַנד פון די אַפּלאַקיישאַן פֿאַר פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן איז באַשטימט לויט צו פאַרשידענע צוועקן פון וויסנשאפטלעכע פאָרשונג און קליניש טעסטינג.נאָך מאכן קליין וואַליומז אַזאַ ווי 20ול, עס איז נייטיק צו מאַכן אַ שנור צושטאַנד ווען מאכן די גרייס, אַנדערש עס וועט פאַרלאָזן.

גשמיות סיבות: טראַנספאָרמאַציע איז זייער וויכטיק פֿאַר פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן.אויב די דידזשענעריישאַן טעמפּעראַטור איז נידעריק, די דידזשענעריישאַן צייַט איז קורץ, עס איז מסתּמא צו פאַלן אין פאַלש נעגאַטיוועס;צו נידעריק אַנילינג טעמפּעראַטור קענען גרונט ניט-ספּעציפיש אַמפּלאַפאַקיישאַן און רעדוצירן ספּעציפיש אַמפּלאַפאַקיישאַן עפעקטיווקייַט.העכסט ווירקן די קאָמבינאַציע פון ​​אָנפאַנגער און טעמפּלאַטעס צו רעדוצירן פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן עפעקטיווקייַט.מאל עס איז נייטיק צו נוצן נאָרמאַל טערמאַמאַטערז צו דעטעקט די וועריאַביליטי, אַנילינג און עקסטענדעד טעמפּעראַטור אין די פאַרלענגערונג אָדער וואַסער-סאַליאַבאַל קוקער, וואָס איז איינער פון די סיבות פֿאַר די דורכפאַל פון די פּקר.

ציל סיקוואַנס וועריאַנץ: אויב די ציל סיקוואַנס אַקערז, אַ מיוטיישאַן אָדער דילישאַן, די קאָמבינאַציע פון ​​​​די פּראָוטאַטייפּ און די מוסטער איז קאַמביינד, אָדער רעכט צו דער פעלן פון אַ ציל סיקוואַנס, די אָנפאַנגער און די מוסטער וועט פאַרלירן די קאַמפּלאַמענטשי סיקוואַנס, און די פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן וועט נישט זיין געראָטן.

● פאַלש positive

די PCR אַמפּלאַפאַקיישאַן באַנד איז קאָנסיסטענט מיט די ציל סיקוואַנס באַנד, און מאל זייַן באַנד איז מער ציכטיק און העכער.

אָנפאַנגער פּלאַן איז נישט צונעמען: די אויסגעקליבן אַמפּלאַפאַקיישאַן סיקוואַנס און ניט-ציל אַמפּלאַפאַקיישאַן סיקוואַנס האָבן כאָומאַלאַדזשיאַס, אַזוי ווען פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן, די אַמפּלאַפייד פּקר פּראָדוקטן זענען ניט-ציל סיקוואַנסיז.דער ציל סיקוואַנס איז צו קורץ אָדער די אָנפאַנגער איז צו קורץ, און עס איז פּראָנע צו פאַלש positive.דאַרפֿן צו זיין רידיזיינד.

קרייַז פאַרפּעסטיקונג פון ציל סיקוואַנס אָדער אַמפּלאַפאַקיישאַן פּראָדוקטן: עס זענען צוויי סיבות פֿאַר דעם פאַרפּעסטיקונג: ערשטער, קרייַז פאַרפּעסטיקונג פון די גאנצע גענאָמע אָדער גרויס סעגמאַנץ, וואָס פירן צו פאַלש פּאַזאַטיווז.דעם טיפּ פון פאַלש positive קענען זיין סאַלווד דורך די פאלגענדע מעטהאָדס: זיין אָפּגעהיט און מילד בעשאַס אָפּעראַציע צו פאַרמייַדן די ציל סיקוואַנס פון ינכיילד אין די מוסטער ביקס אָדער שפּריצן אויס פון די סענטריפוגאַל רער.אַחוץ פֿאַר ענזימעס און סאַבסטאַנסיז וואָס קענען נישט וויטסטאַנד הויך טעמפּעראַטורעס, אַלע רייידזשאַנץ אָדער ויסריכט זאָל זיין דיסינפעקטעד מיט הויך דרוק.די סענטריפוגאַל פּייפּס און סאַמפּאַלז זאָל זיין געוויינט אין איין מאָל.ווען נייטיק, איידער אַדינג ספּעסאַמאַנז, די אָפּרוף רער און רייידזשאַנט זענען יקספּאָוזד צו אַלטראַווייאַליט שטראַלן צו צעשטערן די יגזיסטינג נוקלעיק זויער.רגע, קליין פראַגמאַנץ אין די לופט פאַרפּעסטיקונג.די קליין פראַגמאַנץ זענען קירצער ווי די ציל סיקוואַנס, אָבער זיי האָבן זיכער האָמאָלאָגי.עס קענען זיין ספּלייסט מיט יעדער אנדערער.נאָך קאַמפּלאַמענטינג די פּרימערז, די פּקר פּראָדוקט קענען זיין יקספּאַנדיד, וואָס וועט פאַרשאַפן פאַלש positive פּראָדוקציע.עס קענען זיין געניצט צו רעדוצירן אָדער עלימינירן די נעסט פּקר אופֿן.

● דערשייַנען ניט-ספּעציפיש אַמפּלאַפאַקיישאַן באַנד

די באַנדס וואָס זענען ארויס נאָך פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן זענען סתירה מיט די דערוואַרט גרייס, אָדער גרויס אָדער קליין, אָדער אין דער זעלביקער צייט, אָדער אין דער זעלביקער צייט, ספּעציפיש אַמפּלאַפאַקיישאַן באַנדס און ניט-ספּעציפיש אַמפּלאַפאַקיישאַן באַנדס.די ימערדזשאַנס פון ניט-ספּעציפיש באַנדס איז: ערשטער, די פּרימערז זענען דערענדיקט קאַמפּלאַמענטשי צו די ציל סיקוואַנס, אָדער די פּאַלימעראַזיישאַן פון די אָנפאַנגער צו פאָרעם אַ די קנויל.די רגע איז אַז די קאַנסאַנטריישאַן פון MG2 + ייאַנז איז צו הויך, די אַנילינג טעמפּעראַטור איז צו נידעריק, און די נומער פון פּקר סייקאַלז איז פֿאַרבונדענע.צווייטנס, די קוואַליטעט און סומע פון ​​ענזימעס.אָפט, ענזימעס פון עטלעכע קוואלן זענען פּראָנע צו ניט-ספּעציעל באַנדס און די ענזימעס פון די אנדערע מקור זענען נישט פארגעקומען.מאל ניט-ספּעציפיש אַמפּלאַפאַקיישאַן פון ענזימעס אויך פאַלן.די קאַונטערמעזשערז זענען: שייַעך-דיזיינד אַטראַקטיוו, אויב נייטיק.רעדוצירן די סומע פון ​​ענזיים אָדער פאַרבייַטן די ענזיים פון אן אנדער מקור.רעדוצירן די סומע פון ​​ערשטיק, פאַרגרעסערן די סומע פון ​​טעמפּלאַטעס אַפּראָופּרייטלי און רעדוצירן די נומער פון סייקאַלז.רעכט פאַרגרעסערן די אַנילינג טעמפּעראַטור אָדער נוצן די צוויי טעמפּעראַטור פונט אופֿן (93 ° C דידזשענעריישאַן, אַנילינג און יקסטענדינג בייַ וועגן 65 ° C).

● דערשייַנען פלייקי שלעפּן אָדער שמיר טאַשמע

פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן מאל סימז צו זיין געווענדט אָדער שעלז אָדער טעפּעך-ווי גאַרטל.פֿאַר די סיבה, רעכט צו דער יבעריק סומע פון ​​ענזימעס אָדער די נעבעך קוואַליטעט פון די ענזיים, די דנטפּ קאַנסאַנטריישאַן איז צו הויך, די Mg2+ קאַנסאַנטריישאַן איז צו הויך, די אַנילינג טעמפּעראַטור איז צו נידעריק און די נומער פון סייקאַלז איז צו פיל.די קאַונטערמעזשערז זענען: ① רעדוצירן די סומע פון ​​ענזימעס, אָדער טוישן די ענזיים פון אן אנדער מקור.② רעדוצירן די קאַנסאַנטריישאַן פון דנטפּ ③ רעכט רעדוצירן די קאַנסאַנטריישאַן פון Mg2+.④ פאַרגרעסערן די קוואַנטיטי פון טעמפּלאַטעס און רעדוצירן די נומער פון סייקאַלז.

פֿאַרבונדענע פּראָדוקטן

PCR Heroᵀᴹ (מיט פאַרב)

◮ העכער פאַדעלאַטי: 6 מאל אַז פון פּראָסט טאַק ענזיים;

◮ פאַסטער אַמפּלאַפאַקיישאַן גיכקייַט

◮ מער מוסטער אַדאַפּטאַבילאַטי

◮ העכער אַמפּלאַפאַקיישאַן עפעקטיווקייַט

◮ ענוויראָנמענטאַל טאָלעראַנץ איז שטארקער: געשטעלט בייַ 37 ° C פֿאַר אַ וואָך, מיינטיינינג מער ווי 90% טעטיקייט;

◮ עס האט 5'→3' דנאַ פּאָלימעראַסע טעטיקייט און 5'→3' עקסאָנוקלאַסע טעטיקייט, אָן 3'→5' עקסאָנוקלעאַסע טעטיקייט.

PCR Easyᵀᴹ (מיט פאַרב)

די יינציק אָפּרוף סיסטעם און הויך-עפעקטיווקייַט טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע מאַכן די פּקר אָפּרוף האָבן העכער אַמפּלאַפאַקיישאַן עפעקטיווקייַט, ספּעסיפיקייט און סענסיטיוויטי.

רט-qPCR Easyᵀᴹ (איין סטעפּ)-SYBR Green I

◮ איין-שריט קיט מאכט פאַרקערט טראַנסקריפּציע און qPCR צוויי ריאַקשאַנז אין דער זעלביקער רער, נאָר דאַרפֿן צו לייגן טעמפּלאַטע רנאַ, ספּעציפיש פּקר אָנפאַנגער און רנאַסע-פריי דדה.₂O.

◮ די קיט קענען געשווינד און יפישאַנטלי קוואַנטיטאַטיווע אַנאַלייז וויראַל רנאַ אָדער שפּור רנאַ.

◮ די קיט ניצט אַ יינציק Foregene פאַרקערט טראַנסקריפּציע רייידזשאַנט און Foregene HotStar Taq DNA פּאָלימעראַסע קאַמביינד מיט אַ יינציק אָפּרוף סיסטעם צו יפעקטיוולי פֿאַרבעסערן די אַמפּלאַפאַקיישאַן עפעקטיווקייַט און ספּעציפֿישקייט פון דער אָפּרוף.

◮ די אָפּטימיזעד אָפּרוף סיסטעם מאכט דער אָפּרוף האָבן העכער דיטעקשאַן סענסיטיוויטי, שטארקער טערמאַל פעסטקייַט און בעסער טאָלעראַנץ.

◮ RT-qPCR גרינג^TM(איין סטעפּ)-SYBR גרין I קיט קומט מיט ROX ינערלעך רעפֿערענץ פאַרב, וואָס קענען זיין געוויינט צו עלימינירן סיגנאַל הינטערגרונט און סיגנאַל ערראָרס צווישן וועלז, וואָס איז באַקוועם פֿאַר קאַסטאַמערז צו נוצן אין פאַרשידענע מאָדעלס פון קוואַנטיטאַטיווע פּקר ינסטראַמאַנץ.

RT Easy^TMוו (האר פּרעמיקס פֿאַר ערשטער-שנירל cDNA סינטעז פֿאַרפאַקטיש צייט PCR)

- עפעקטיוו פיייקייט צו באַזייַטיקן gDNA, וואָס קענען באַזייַטיקן GDNA אין די מוסטער אין 2 מינוט.

- עפעקטיוו פאַרקערט טראַנסקריפּציע סיסטעם, עס נעמט בלויז 15 מינוט צו פאַרענדיקן די סינטעז פון דער ערשטער שנירל קדנאַ.

-קאָמפּלעקס טעמפּלאַטעס: טעמפּלאַטעס מיט הויך גק אינהאַלט און קאָמפּלעקס צווייטיק סטרוקטור קענען אויך זיין ריווערסט מיט הויך עפעקטיווקייַט.

- הויך סענסיטיוויטי פאַרקערט טראַנסקריפּציע סיסטעם, פּג-מדרגה טעמפּלאַטעס קענען אויך באַקומען הויך-קוואַליטעט קדנאַ.

-די פאַרקערט טראַנסקריפּציע סיסטעם האט הויך טערמאַל פעסטקייַט, די אָפּטימאַל אָפּרוף טעמפּעראַטור איז 42 ℃, און עס נאָך האט אַ גוט פאַרקערט טראַנסקריפּציע פאָרשטעלונג ביי 50 ℃.