פלואָרעססענסע קוואַנטיטאַטיווע פּקר (אויך באקאנט ווי טאַקמאַן פּקר, יענטע ריפערד צו ווי FQ-PCR) איז אַ נייַ נוקלעיק זויער קוואַנטיטאַטיווע טעכנאָלאָגיע דעוועלאָפּעד דורך פּע (פּערקין עלמער) אין די פאַרייניקטע שטאַטן אין 1995. די טעכנאָלאָגיע איז באזירט אויף קאַנווענשאַנאַל פּקר דורך אַדינג פלורעסאַנט לייבאַלד פּראָבעס.קאַמפּערד מיט פלעקסאַבאַל פּקר, FQ-PCR האט פילע אַדוואַנטידזשיז צו פאַרשטיין זייַן קוואַנטיטאַטיווע פונקציע.דער אַרטיקל בדעה צו בעקיצער באַשרייַבן די קעראַקטעריסטיקס, פּרינסאַפּאַלז, מעטהאָדס און אַפּלאַקיישאַנז פון די טעכנאָלאָגיע.

1 פֿעיִקייטן

FQ-PCR האט ניט בלויז די הויך סענסיטיוויטי פון פּראָסט פּקר, אָבער אויך ווייַל פון די אַפּלאַקיישאַן פון פלורעסאַנט פּראָבעס, עס קענען גלייך דעטעקט די ענדערונג פון פלורעסאַנט סיגנאַל בעשאַס פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן דורך די פאָטאָעלעקטריק קאַנדאַקשאַן סיסטעם צו באַקומען קוואַנטיטאַטיווע רעזולטאַטן, וואָס מנצח פילע שאָרטקאָמינגס פון קאַנווענשאַנאַל פּקר, אַזוי עס אויך האט די הויך ספּעסיפיקאַטי פון דנאַ כייבראַדז טעכנאָלאָגיע.

פֿאַר בייַשפּיל, אַלגעמיינע פּקר פּראָדוקטן דאַרפֿן צו זיין באמערקט דורך אַגאַראָסע געל עלעקטראָפאָרעסיס און עטהידיום בראָומייד סטיינינג מיט אַלטראַווייאַליט ליכט אָדער דורך פּאָליאַקרילאַמידע געל עלעקטראָפאָרעסיס און זילבער סטיינינג.דאָס ניט בלויז ריקווייערז קייפל ינסטראַמאַנץ, אָבער אויך נעמט צייט און מי.די סטאַינס געניצט עטהידיום בראָומייד איז שעדלעך צו דעם מענטש גוף, און די קאָמפּליצירט יקספּערמענאַל פּראָוסידזשערז צושטעלן אַפּערטונאַטיז פֿאַר פאַרפּעסטיקונג און פאַלש פּאַזאַטיווז.אָבער, FQ-PCR דאַרף בלויז עפֿענען דעם דעקל אַמאָל בעשאַס מוסטער לאָודינג, און דער סאַבסאַקוואַנט פּראָצעס איז גאָר פארמאכט-רער אָפּעראַציע, וואָס טוט נישט דאַרפן פּקר פּאָסט-פּראַסעסינג, אַוווידיד פילע דיסאַדוואַנטידזשיז אין קאַנווענשאַנאַל פּקר אַפּעריישאַנז.דער עקספּערימענט בכלל ניצט די ABI7100 PCR טערמאַל סיקלער דעוועלאָפּעד דורך פּע פירמע.

די קיילע האט די פאלגענדע קעראַקטעריסטיקס: ① ברייט אַפּלאַקיישאַן: עס קענען זיין געוויינט פֿאַר דנאַ און רנאַ פּקר פּראָדוקט קוואַנטאַפאַקיישאַן, דזשין אויסדרוק פאָרשונג, פּאַטאַדזשאַן דיטעקשאַן און אַפּטאַמאַזיישאַן פון פּקר טנאָים.② יינציק קוואַנטיטאַטיווע פּרינציפּ: ניצן פלואָרעססענטלי לייבאַלד פּראָבעס, די סומע פון ​​פלורעסאַנס וועט אַקיומיאַלייט מיט די פּקר ציקל נאָך לאַזער עקסייטיישאַן, צו דערגרייכן דעם ציל פון קוואַנטיפיקאַטיאָן.③ הויך אַרבעט עפעקטיווקייַט: געבויט-אין 9600 פּקר טערמאַל סייקאַלער, קאָמפּיוטער קאַנטראָולד 1 צו 2 שעה צו פאַרענדיקן די אַמפּלאַפאַקיישאַן און קוואַנטאַפאַקיישאַן פון 96 סאַמפּאַלז אויטאָמאַטיש און סינטשראָנאָוסלי.④ ניט דאַרפֿן פֿאַר געל עלעקטראָפאָרעסיס: ניט דאַרפֿן צו צעפירן און עלעקטראָפאָרעסיס די מוסטער, נאָר נוצן אַ ספּעציעל זאָנד צו דעטעקט גלייַך אין דער אָפּרוף רער.⑤ קיין פאַרפּעסטיקונג אין די רערנ - ליניע: די יינציק גאָר ענקלאָוזד אָפּרוף רער און פאָטאָעלעקטריק קאַנדאַקשאַן סיסטעם זענען אנגענומען, אַזוי עס איז ניט דאַרפֿן צו זאָרג וועגן פאַרפּעסטיקונג.⑥ די רעזולטאַטן זענען רעפּראָדוסיבלע: די קוואַנטיטאַטיווע דינאַמיש קייט איז אַרויף צו פינף אָרדערס פון מאַגנאַטוד.דעריבער, זינט דעם טעכנאָלאָגיע איז הצלחה דעוועלאָפּעד, עס איז געווען וואַליוד דורך פילע וויסנשאפטלעכע ריסערטשערז און איז געווען געווענדט אין פילע פעלדער.

2 פּרינציפּן און מעטהאָדס

דער אַרבעט פּרינציפּ פון FQ-PCR איז צו נוצן די 5′→3′ עקסאָנוקלעאַסע טעטיקייט פון טאַק ענזיים צו לייגן אַ פלורעסאַנטלי לייבאַלד זאָנד צו די פּקר אָפּרוף סיסטעם.די זאָנד קענען ספּאַסיפיקלי כייברידיזירן מיט די דנאַ מוסטער קאַנטיינד אין די אָנפאַנגער סיקוואַנס.די 5′ סוף פון די זאָנד איז לייבאַלד מיט די פלואָרעססענסע ימישאַן דזשין FAM (6-קאַרבאָקסיפלאָרעססעין, פלואָרעססענסע ימישאַן שפּיץ ביי 518nm), און די 3'ענד איז לייבאַלד מיט די פלואָרעססענסע קווענטשינג גרופּע TAMRA (6-קאַרבאָקסיטעטראַמעטהילואָרעססעין ביי 518nm), גיינינג פון די זאָנד איז פאָספאָרילאַטעד צו פאַרמייַדן די זאָנד פון עקסטענדעד בעשאַס פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן.ווען די זאָנד בלייבט בעשאָלעם, די קווענטשער גרופּע סאַפּרעסיז די פלואָרעססענסע ימישאַן פון די ימיטינג גרופּע.אַמאָל די ימיטינג גרופּע איז אפגעשיידט פון די קווענטשינג גרופּע, די ינאַבישאַן איז אויפגעהויבן, און די אָפּטיש געדיכטקייַט ביי 518nm ינקריסיז און איז דיטעקטאַד דורך די פלואָרעססענסע דיטעקשאַן סיסטעם.ווען די זאָנד איז שנייַדן אַוועק, די קווענטשינג ווירקונג איז באפרייט און די פלורעסאַנט סיגנאַל איז באפרייט.יעדער מאָל די מוסטער איז קאַפּיד, אַ זאָנד איז שנייַדן אַוועק, באגלייט דורך די מעלדונג פון אַ פלורעסאַנט סיגנאַל.זינט עס איז אַ איין-צו-איינער שייכות צווישן די נומער פון רעלעאַסעד פלואָראָפאָרעס און די נומער פון פּקר פּראָדוקטן, די טעכניק קענען ווערן גענוצט צו אַקיעראַטלי קוואַנטיפיצירן די מוסטער.די יקספּערמענאַל ינסטרומענט בכלל ניצט די ABI7100 PCR טערמאַל סייקאַלער דעוועלאָפּעד דורך פּע פירמע, און אנדערע טערמאַל סייקאַלז קענען אויך זיין געוויינט.אויב די ABI7700 אָפּרוף אָפּרוף סיסטעם איז געניצט פֿאַר דער עקספּערימענט, נאָך דער אָפּרוף איז געענדיקט, די קוואַנטיטאַטיווע רעזולטאַטן קענען זיין גלייך געגעבן דורך קאָמפּיוטער אַנאַליסיס.אויב איר נוצן אנדערע טערמאַל סייקאַלז, איר דאַרפֿן צו נוצן אַ פלורעסאַנס דעטעקטאָר צו מעסטן די פלואָרעססענסע סיגנאַל אין די אָפּרוף רער אין דער זעלביקער צייט צו רעכענען RQ +, RQ-, △RQ.RQ+ רעפּראַזענץ די פאַרהעלטעניש פון די לומאַנעסאַנס ינטענסיטי פון די פלורעסאַנט ימישאַן גרופּע פון ​​די מוסטער רער צו די לומאַנעסאַנס ינטענסיטי פון די קווענטשינג גרופּע, RQ- רעפּראַזענץ די פאַרהעלטעניש פון די צוויי אין די ליידיק רער, △RQ (△RQ=RQ+-RQ-) רעפּראַזענץ די סומע פון ​​​​די פלואָרעססענסע ענדערונגען בעשאַס די פלואָרעססענסע פּראָצעס קענען זיין באקומען.רעכט צו דער הקדמה פון פלורעסאַנט פּראָבעס, די ספּעציפֿישקייט פון דער עקספּערימענט איז באטייטיק ימפּרוווד.דער זאָנד פּלאַן זאָל בכלל טרעפן די פאלגענדע טנאָים: ① די לענג פון די זאָנד זאָל זיין וועגן 20-40 באַסעס צו ענשור די ספּעציפֿישקייט פון ביינדינג.②די אינהאַלט פון GC באַסעס איז צווישן 40% און 60% צו ויסמיידן דופּליקיישאַן פון איין נוקלעאָטידע סיקוואַנסיז.③ ויסמיידן כייברידיזיישאַן אָדער אָוווערלאַפּ מיט פּרימערז.④ די פעסטקייַט פון די ביינדינג צווישן די זאָנד און די מוסטער איז גרעסער ווי די פעסטקייַט פון די ביינדינג צווישן די אָנפאַנגער און די מוסטער, אַזוי די Tm ווערט פון די זאָנד זאָל זיין בייַ מינדסטער 5 ° C העכער ווי די Tm ווערט פון די אָנפאַנגער.אין דערצו, די קאַנסאַנטריישאַן פון די זאָנד, די כאָומאַלאַדזשי צווישן די זאָנד און די מוסטער סיקוואַנס, און די ווייַטקייט צווישן די זאָנד און די אָנפאַנגער אַלע האָבן אַ פּראַל אויף די יקספּערמענאַל רעזולטאַטן.

פֿאַרבונדענע פּראָדוקטן:

טשיינאַ Lnc-RT Heroᵀᴹ איך (מיט גדנאַסע) (סופּער פּרעמיקס פֿאַר ערשטער-שנירל קדנאַ סינטעז פון לנקרנאַ) פאַבריקאַנט און סאַפּלייער |Foregene (foreivd.com)

טשיינאַ פאַקטיש צייט פּקר Easyᵀᴹ-טאַקמאַן מאַנופאַקטורער און סאַפּלייער |Foregene (foreivd.com)