• facebook
  • לינקעדין
  • יאָוטובע

באַשטעטיקן די פאָרשטעלונג פון אָנפאַנגער און פּראָבעס אין דער פרי בינע פון ​​פּקר רייידזשאַנץ און דיטערמאַנינג די מערסט פּאַסיק אָפּרוף טנאָים זענען די פּרירעקוואַזאַץ צו ענשור די גלאַט פּראָגרעס פון פאָרמאַל יקספּעראַמאַנץ.

אַזוי ווי טאָן מיר דאַרפֿן צו באַשטעטיקן די אָנפאַנגער זאָנד אין דער פרי בינע?

די הויפּט ינדיקאַטאָרס זענען באַסעלינע, אַמפּלאַפאַקיישאַן ויסבייג, קט ווערט, אַמפּלאַפאַקיישאַן עפעקטיווקייַט, נידעריק-קאַנסאַנטריישאַן מוסטער דיטעקשאַן, קוו, עטק.

באַסעלינע

די באַסעלינע איז די האָריזאָנטאַל שורה אין די פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן ויסבייג.אין דער ערשטער ביסל סייקאַלז פון די פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן אָפּרוף, די פלורעסאַנס סיגנאַל טוט נישט טוישן פיל און פארמען אַ גלייַך שורה.דעם גלייַך שורה איז די באַסעלינע.

ווען זיפּונג פּקר אָנפאַנגער פּראָבעס, באַצאָלן ופמערקזאַמקייט צו צי די באַסעלינע איז גלייַך.די ריינקייַט פון די אָנפאַנגער זאָנד קאַנסאַנטריישאַן וועט ווירקן די באַסעלינע, אַזאַ ווי קאָזינג די באַסעלינע צו העכערונג אָדער פאַלן.די באַסעלינע איז אויך אַ זייער ינטואַטיוו גראדן.
אַנאַליסיס

Amplification Curve

אן אנדער ינטואַטיוו גראדן איז די פאָרעם פון די אַמפּלאַפאַקיישאַן ויסבייג.עס איז בעסטער צו האָבן אַ ס-שייפּט ויסבייג צו ויסמיידן צווייטיק אַמפּלאַפאַקיישאַן אָדער אנדערע אַבנאָרמאַל אַמפּלאַפאַקיישאַן קורוועס.
null

קט ווערט

די נומער פון סייקאַלז קאָראַספּאַנדינג צו די ינפלעקשאַן פונט פון די באַסעלינע צו די עקספּאָונענשאַל וווּקס איז די Ct ווערט.

פֿאַר דער זעלביקער מוסטער, פאַרשידענע אָנפאַנגער פּראָבעס רעזולטאַט אין פאַרשידענע אַמפּלאַפאַקיישאַן קורוועס, און די קאָראַספּאַנדינג Ct ווערט וועט זיין אַפעקטאַד דורך די אַמפּלאַפאַקיישאַן עפעקטיווקייַט און ינטערפיראַנס גראַד.אין טעאָריע, די קלענערער די Ct ווערט פון די אָנפאַנגער זאָנד מיר קלייַבן, די בעסער.

אַנאַליסיס-3

אַמפּלאַפאַקיישאַן עפיקאַסי

איינער פון די מערסט פאַרלאָזלעך און סטאַביל מעטהאָדס פֿאַר יוואַליוייטינג פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן עפעקטיווקייַט איז די נאָרמאַל ויסבייג, וואָס איז אויך וויידלי אנערקענט דורך ריסערטשערז.דער אופֿן ינוואַלווז מאכן אַ סעריע פון ​​סאַמפּאַלז צו קאָנטראָלירן די קאָרעוו נומער פון ציל טעמפּלאַטעס.די סאַמפּאַלז זענען יוזשאַוואַלי געמאכט דורך סיריאַל דילושאַנז פון קאַנסאַנטרייטאַד לאַגער סאַלושאַנז, די מערסט קאַמאַנלי געניצט איז 10-פאַרלייגן דיילושאַן.ניצן אַ סעריע פון ​​דיילוטאַד סאַמפּאַלז, ניצן נאָרמאַל qPCR פּראָגראַם צו אַמפּלאַפיי צו באַקומען די Cq ווערט, און לעסאָף ציען אַ נאָרמאַל ויסבייג לויט די קאַנסאַנטריישאַן פון יעדער מוסטער און די קאָראַספּאַנדינג Cq ווערט צו באַקומען די לינעאַר יקווייזשאַן Cq= -klgX0+b, און די אַמפּלאַפאַקיישאַן עפעקטיווקייַט E=10(-1 /k)-1.ווען ניצן qPCR פֿאַר קוואַנטיטאַטיווע אַנאַליסיס, די אַמפּלאַפאַקיישאַן עפעקטיווקייַט איז פארלאנגט צו זיין אין די קייט פון 90% -110% (3.6> ק>3.1).

אַנאַליסיס-4

נידעריק-קאַנסאַנטריישאַן סאַמפּאַלז דעטעקשאַן

ווען די מוסטער קאַנסאַנטריישאַן איז נידעריק, די דיטעקשאַן ראַטעס פון פאַרשידענע אָנפאַנגער פּראָבעס זענען אַנדערש.מיר אויסקלייַבן 20 נידעריק-קאַנסאַנטריישאַן סאַמפּאַלז צו רעפּלאַקייט, און די אָנפאַנגער-זאָנד סיסטעם מיט די העכסטן דיטעקשאַן קורס איז דער בעסטער.

אַנאַליסיס-5

ווערייישאַן קאָואַפישאַנט (CV)

10 דופּליקאַט סאַמפּאַלז קענען זיין דיטעקטאַד מיט פאַרשידענע אָנפאַנגער פּראָבעס לויט די שורה נאָרמאַל פון די רייידזשאַנט פֿאַר דיטעקשאַן פון נוקלעיק זויער אַמפּלאַפאַקיישאַן.

אַנאַליסיס-6

קוואַנטיטאַטיווע רעאַגענץ:
אַקיעראַסי
די אַקיעראַסי אין איין פּעקל זאָל טרעפן: די ווערייישאַן קאָואַפישאַנט (קוו,%) פון די לאָגאַריטהמיק ווערט פון די פּראָבע קאַנסאַנטריישאַן איז ≤5%.ווען די מוסטער קאַנסאַנטריישאַן איז נידעריק, די ווערייישאַן קאָואַפישאַנט (CV,%) פון די לאָגאַריטהם פון די דיטעקשאַן קאַנסאַנטריישאַן איז ≤10%


קוואַליטאַטיווע רעאַגענץ:
אַקיעראַסי
די אַקיעראַסי אין איין פּעקל זאָל טרעפן:

(1) ווערייישאַן קאָואַפישאַנט פון Ct ווערט (קוו,%) ≤5%

דער זעלביקער מוסטער איז טעסטעד אין פּאַראַלעל פֿאַר 10 מאל, און די פּרובירן רעזולטאַטן זאָל זיין קאָנסיסטענט


פּאָסטן צייט: סעפטעמבער 18-2021