עטלעכע רעוואלוציאנער המצאות אין דער געשיכטע פון דיטעקשאַן טעכנאָלאָגיע אין מיין מיינונג זענען ימיונאָלאַבאַלינג טעכנאָלאָגיע באזירט אויף דעם פּרינציפּ פון אַנטיגען-אַנטיבאָדי ספּעציפיש ביינדינג, פּקר טעכנאָלאָגיע און סיקוואַנסינג טעכנאָלאָגיע.הייַנט מיר וועלן רעדן וועגן PCR טעכנאָלאָגיע.לויט דער עוואָלוציע פון פּקר טעכנאָלאָגיע, מענטשן געוויינטלעך טיילן פּקר טעכנאָלאָגיע אין דריי דורות: פּראָסט פּקר טעכנאָלאָגיע, פאַקטיש-צייט פלורעסאַנט קוואַנטיטאַטיווע פּקר טעכנאָלאָגיע און דיגיטאַל פּקר טעכנאָלאָגיע.
COmmon PCR טעכניק
KARY MULLIS (1944.12.28-2019.8.7)
קאַרי מולליס ינווענטיד די פּאָלימעראַסע קייט רעאַקציע (פּאָלימעראַסע קייט רעאַקציע, פּקר) אין 1983. עס איז געזאגט אַז ווען ער איז געווען דרייווינג זיין כאַווערטע, ער פּלוצלינג האט אַ בליץ פון ינספּיראַציע און געדאַנק פון דעם פּרינציפּ פון פּקר (אויף די בענעפיץ פון דרייווינג).קאַרי מוליס איז געווען אַוואָרדיד דעם נאָבעל פרייז אין כעמיע אין 1993. די New York Times קאַמענטאַד: "העכסט אָריגינעל און באַטייטיק, כּמעט דיטיילד ביאָלאָגי אין פאַר-פּקר און פּאָסט-פּקר עראַס.
דער פּרינציפּ פון פּקר: אונטער די קאַטאַליסיס פון דנאַ פּאָלימעראַסע, די מוטער שנירל דנאַ איז געניצט ווי דער מוסטער, און דער ספּעציפיש אָנפאַנגער איז געניצט ווי די סטאַרטינג פונט פון פאַרלענגערונג, און די טאָכטער שנירל דנאַ קאַמפּלאַמענטשי צו די מוטער שנירל מוסטער דנאַ איז קאַפּיד אין וויטראָ דורך דענאַטוראַטיאָן, אַנילינג, פאַרלענגערונג און אנדערע סטעפּס.עס איז אַ דנאַ סינטעז אַמפּלאַפאַקיישאַן טעכנאָלאָגיע אין וויטראָ, וואָס קענען ראַפּאַדלי און ספּאַסיפיקלי פאַרגרעסערן קיין ציל דנאַ אין וויטראָ.
אַדוואַנטאַגעס פון פּראָסט פּקר
1.קלאַסיש אופֿן, גאַנץ אינטערנאַציאָנאַלער און דינער סטאַנדאַרדס
2.נידעריקער פּרייַז פון קיילע רייידזשאַנץ
3.פּקר פּראָדוקטן קענען זיין ריקאַווערד פֿאַר אנדערע מאָלעקולאַר ביאָלאָגי יקספּעראַמאַנץ
רעקאַמענדיד פאָרעגענ פּקר מאַשין: https://www.foreivd.com/foreamp-sn-695-series-thermal-cycler-96-wells-pcr-machine-product/
פֿאַרבונדענע פּראָדוקטן: https://www.foreivd.com/pcr-herotm-with-dye-product/
דיסאַדוואַנטידזשיז פון פּראָסט פּקר
1.גרינג צו באַשמוצן
2.קאַמבערסאַם אָפּעראַציע
3.בלויז קוואַליטאַטיווע אַנאַליסיס
4.מעסיק סענסיטיוויטי
5.עס איז ניט-ספּעציפיש אַמפּלאַפאַקיישאַן, און ווען די ניט-ספּעציפיש באַנד איז די זעלבע גרייס ווי די ציל באַנד, עס קענען ניט זיין אונטערשיידן
Cאַפּיללאַרי עלעקטראָפאָרעסיס-באזירט פּקר
אין ענטפער צו די שאָרטקאָמינגס פון פּראָסט פּקר, עטלעכע מאַניאַפאַקטשערערז האָבן באַקענענ ינסטראַמאַנץ באזירט אויף דעם פּרינציפּ פון קאַפּאַלערי עלעקטראָפאָרעסיס.די עלעקטראָפאָרעסיס שריט נאָך פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן איז געענדיקט אין די קאַפּאַלערי.די סענסיטיוויטי איז העכער, און די חילוק פון עטלעכע באַסעס קענען זיין אונטערשיידן און די אַמפּלאַפאַקיישאַן קענען זיין קאַלקיאַלייטיד דורך MAERKER.פּראָדוקט אינהאַלט.די כיסאָרן איז אַז די PCR פּראָדוקט דאַרף נאָך זיין געעפנט און שטעלן אין די ינסטרומענט, און עס איז נאָך אַ גרויס ריזיקירן פון קאַנטאַמאַניישאַן.
CאַפּילאַריEלעקטראָפּאָרעסיס
2. פאַקטיש-צייט פלורעסאַנט קוואַנטיטאַטיווע פּקר (קוואַנטיטאַטיווע פאַקטיש-צייט פּקר, קפּקר) טעכנאָלאָגיעפלורעסאַנט קוואַנטיטאַטיווע פּקר, אויך גערופן רעאַל-צייט פּקר, איז אַ נייַע נוקלעיק זויער קוואַנטיטאַטיווע טעכנאָלאָגיע דעוועלאָפּעד דורך פּע (פּערקין עלמער) אין 1995. די אַנטוויקלונג געשיכטע פון פלורעסאַנט קוואַנטיטאַטיווע פּקר איז אַ געשיכטע פון נשמה-סטירינג ראנגלענישן פון דזשייאַנץ אַזאַ ווי אַבי, ראָטשע, און ביאָ-ראַד.אויב איר זענט אינטערעסירט, איר קענען קאָנטראָלירן עס.דער טעכניק איז דערווייַל די מערסט דערוואַקסן און וויידלי געניצט האַלב-קוואַנטיטאַטיווע פּקר טעכניק.
רעקאַמענדיד qPCR מאַשין: https://www.foreivd.com/mini-real-time-pcr-system-forequant-sf2sf4-product/
פלורעסאַנט פאַרב אופֿן (סיבר גרין איך):SYBR גרין איך איז די מערסט קאַמאַנלי געניצט דנאַ-ביינדינג פאַרב פֿאַר קוואַנטיטאַטיווע פּקר, וואָס ביינדז ניט-ספּעציפיש צו טאָפּל-סטראַנדיד דנאַ.אין דער פריי שטאַט, SYBR גרין עמיץ שוואַך פלואָרעססענסע, אָבער אַמאָל געבונדן צו טאָפּל-סטראַנדיד דנאַ, זייַן פלואָרעססענסע ינקריסיז 1000-פאַרלייגן.דעריבער, די גאַנץ פלורעסאַנט סיגנאַל ימיטיד דורך אַ אָפּרוף איז פּראַפּאָרשאַנאַל צו די סומע פון דאַפּעל-סטראַנדיד דנאַ פאָרשטעלן און וועט פאַרגרעסערן מיט די פאַרגרעסערן פון אַמפּלאַפייד פּראָדוקט.זינט די פאַרב ביינדז ניט-ספּעציפיש צו טאָפּל-סטראַנדיד דנאַ, פאַלש positive רעזולטאַטן קען זיין דזשענערייטאַד.
פֿאַרבונדענע פּראָדוקטן: https://www.foreivd.com/real-time-pcr-easytm-sybr-green-i-kit-product/
פלורעסאַנט זאָנד אופֿן (טאַקמאַן טעכנאָלאָגיע): בעשאַספּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן, אַ ספּעציפיש פלורעסאַנט זאָנד איז מוסיף אין דער זעלביקער צייט ווי אַ פּאָר פון אָנפאַנגער.די זאָנד איז אַ לינעאַר אָליגאָנוקלעאָטידע, מיט אַ פלורעסאַנט רעפּאָרטער גרופּע און אַ פלורעסאַנט קווענטשער גרופּע ריספּעקטיוולי לייבאַלד ביי ביידע ענדס.ווען די זאָנד איז בעשאָלעם, די פלורעסאַנט סיגנאַל ימיטיד דורך די רעפּאָרטער גרופּע איז אַבזאָרבד דורך די קווענטשער גרופּע, און די דיטעקשאַן עס איז קיין פלורעסאַנט סיגנאַל;בעשאַס PCR אַמפּלאַפאַקיישאַן (אין די פאַרלענגערונג בינע), די 5'-3' Dicer טעטיקייט פון Taq ענזיים וועט דיידזשעסטיד און דיגרייד די זאָנד, אַזוי אַז די רעפּאָרטער פלורעסאַנט גרופּע און די קווענטשער פלורעסאַנט גרופּע זענען אפגעשיידט, אַזוי אַז די פלואָרעססענסע מאָניטאָרינג סיסטעם קענען זיין באקומען. דער אַנטוויקלונג פון פלורעסאַנט סיגנאַלז און די פאָרמירונג פון פּקר פּראָדוקטן.טאַקמאַן זאָנד אופֿן איז די מערסט קאַמאַנלי געניצט דיטעקשאַן אופֿן אין קליניש דיטעקשאַן.
פֿאַרבונדענע פּראָדוקטן: https://www.foreivd.com/quickeasy%e1%b5%80%e1%b4%b9-real-time-pcr-kit-taqman-product/
אַדוואַנטאַגעס פון qPCR
1.דער אופֿן איז דערוואַקסן און די שטיצן ויסריכט און רייידזשאַנץ זענען גאַנץ
2.מיטל פּרייַז פון רייידזשאַנץ
3.גרינג צו נוצן
4.הויך דיטעקשאַן סענסיטיוויטי און ספּעסיפיקאַטי
דיסאַדוואַנטידזשיז פון qPCR
די מיוטיישאַן פון די ציל דזשין פירט צו מיסט דיטעקשאַן.
די דיטעקשאַן רעזולטאַט פון נידעריק-קאַנסאַנטריישאַן מוסטער קענען ניט זיין באשלאסן.
עס איז אַ גרויס טעות ווען ניצן די נאָרמאַל ויסבייג פֿאַר קוואַנטיטאַטיווע דיטעקשאַן.
3. דיגיטאַל פּקר (דיגיטאַל פּקר, דפּקר) טעכנאָלאָגיע
דיגיטאַל פּקר איז אַ טעכניק פֿאַר די אַבסאָלוט קוואַנטאַפאַקיישאַן פון נוקלעיק זויער מאַלאַקיולז.קאַמפּערד מיט qPCR, דיגיטאַל פּקר קענען גלייַך לייענען די נומער פון דנאַ / רנאַ מאַלאַקיולז, וואָס איז די אַבסאָלוט קוואַנטיפיקאַטיאָן פון נוקלעיק זויער מאַלאַקיולז אין די סטאַרטינג מוסטער.אין 1999, Bert Vogelstein און Kenneth W. Kin-zler פאָרמאַל פארגעלייגט דעם באַגריף פון דפּקר.
אין 2006, Fluidigm איז געווען דער ערשטער צו פּראָדוצירן אַ געשעפט שפּאָן-באזירט דפּקר ינסטרומענט.אין 2009, Life Technologies לאָנטשט די OpenArray און QuantStudio 12K Flex dPCR סיסטעמען.אין 2013, Life Technologies לאָנטשט די QuantStudio 3DdPCR סיסטעם, וואָס ניצט הויך-געדיכטקייַט נאַנאָסקאַלע מיקראָפלוידיק שפּאָן טעכנאָלאָגיע צו יוואַנלי פאַרשפּרייטן סאַמפּאַלז צו 20,000 יחיד סעלז.אין דער אָפּרוף געזונט.
אין 2011, Bio-Rad לאָנטשט די דראַפּלאַט-באזירט QX100 dPCR קיילע, וואָס ניצט וואַסער-אין-אָיל טעכנאָלאָגיע צו יוואַנלי פאַרשפּרייטן די מוסטער צו 20,000 דראַפּלאַט-וואַסער-אין-בוימל, און ניצט אַ דראָפּלעט אַנאַליזער צו אַנאַלייז די דראַפּלאַץ.אין 2012, RainDance לאָנטשט די RainDrop dPCR קיילע, געטריבן דורך הויך-דרוק גאַז, צו טיילן יעדער נאָרמאַל אָפּרוף סיסטעם אין אַ אָפּרוף ימאַלשאַן מיט 1 מיליאָן צו 10 מיליאָן פּיקאָליטער-מדרגה מיקראָ-דראַפּלאַץ.
ביז איצט, דיגיטאַל פּקר האט געשאפן צוויי הויפּט פאַקשאַנז, שפּאָן טיפּ און דראַפּלעט טיפּ.ניט קיין ענין וואָס מין פון דיגיטאַל פּקר, די האַרץ פּרינסאַפּאַלז זענען לימאַטינג דיילושאַן, ענדפּוינט פּקר און פּאָיססאָן פאַרשפּרייטונג.דער נאָרמאַל פּקר אָפּרוף סיסטעם מיט נוקלעיק זויער טעמפּלאַטעס איז יוואַנלי צעטיילט אין טענס פון טויזנטער פון פּקר ריאַקשאַנז, וואָס זענען פונאנדערגעטיילט צו טשיפּס אָדער מיקראָדראַפּאַלז, אַזוי אַז יעדער אָפּרוף כּולל ווי פיל ווי מעגלעך אַ מוסטער מאָלעקולאַר, און אַ איין-מאָלעקול טעמפּלאַטע פּקר אָפּרוף איז דורכגעקאָכט.דורך לייענען די פלואָרעססענסע די בייַזייַן אָדער אַוועק פון די סיגנאַל איז גערעכנט, און די אַבסאָלוט קוואַנטאַפאַקיישאַן איז דורכגעקאָכט נאָך קאַלאַבריישאַן פון די סטאַטיסטיש פּאָיססאָן פאַרשפּרייטונג.
די פאלגענדע זענען די קעראַקטעריסטיקס פון עטלעכע דיגיטאַל פּקר פּלאַטפאָרמס וואָס איך האָבן געוויינט:
1. ביאָ-ראַד קקס200 דראָפּלעט דיגיטאַל פּקר ביאָ-ראַדQX200 איז אַ זייער קלאַסיש דיגיטאַל פּקר פּלאַטפאָרמע, די יקערדיק דיטעקשאַן פּראָצעס: 20,000 סאַמפּאַלז זענען דזשענערייטאַד דורך די דראַפּלאַט גענעראַטאָר וואַסער-אין-ייל מיקראָ-דראַפּלאַץ זענען אַמפּלאַפייד אויף אַ פּראָסט פּקר מאַשין, און לעסאָף די פלואָרעססענסע סיגנאַל פון יעדער מיקראָ-דראַפּליט איז לייענען דורך אַ מיקראָ-דראַפּליי לייענער.די אָפּעראַציע איז מער קאָמפּליצירט, און די ריזיקירן פון פאַרפּעסטיקונג איז מיטל.
Xinyi TD1 מיקראָ-דראַפּליט דיגיטאַל פּקרXinyi TD1 איז אַ דינער דיגיטאַל פּקר פּלאַטפאָרמע, די יקערדיק דיטעקשאַן פּראָצעס: דזשענערייט 30,000-50,000 וואַסער-אין-בוימל דראַפּלאַץ דורך אַ דראַפּלאַט גענעראַטאָר, אַמפּלאַפיי אויף אַ פּראָסט פּקר קיילע, און לעסאָף פאָרן די דראַפּלאַט לייענער לייענט די פלורעסאַנט סיגנאַל פון יעדער דראַפּלאַט.ביידע דראַפּלאַט דור און לייענען אין דעם פּלאַטפאָרמע זענען דורכגעקאָכט אין אַ דעדאַקייטאַד שפּאָן מיט נידעריק ריזיקירן פון קאַנטאַמאַניישאַן.
STILLA נאַיקאַ מיקראָ-דראָפּלעט שפּאָן דיגיטאַל פּקרSTILLA Naica איז אַ לעפיערעך נייַ דיגיטאַל פּקר פּלאַטפאָרמע.די גרונט דיטעקשאַן פּראָצעס איז: לייגן די אָפּרוף לייזונג צו די שפּאָן, שטעלן די שפּאָן אין די מיקראָ-דראַפּליט דור און אַמפּלאַפאַקיישאַן סיסטעם און דזשענערייט 30,000 מיקראָ-דראַפּלאַץ.פאַרשפּרייטן אויף די שפּאָן, און PCR אַמפּלאַפאַקיישאַן איז געענדיקט אויף די שפּאָן.דערנאָך די אַמפּלאַפייד שפּאָן איז טראַנספערד צו די מיקראָ-דראַפּליט לייענען אַנאַליסיס סיסטעם, און די פלורעסאַנט סיגנאַל איז לייענען דורך גענומען בילדער.זינט די גאנצע פּראָצעס נעמט אָרט אין אַ פארמאכט שפּאָן, די ריזיקירן פון קאַנטאַמאַניישאַן איז נידעריק.
4. טהערמאָפישער קוואַנטסטודיאָ 3 ד שפּאָן דיגיטאַל פּקר
ThermoFisher QuantStudio 3D איז אן אנדער קלאַסיש שפּאָן-באזירט דיגיטאַל פּקר פּלאַטפאָרמע.זיין יקערדיק דיטעקשאַן פּראָצעס איז: לייגן די אָפּרוף לייזונג אין די ספּרעדער, און פאַרשפּרייטן די אָפּרוף לייזונג יוואַנלי אויף די שפּאָן מיט 20,000 מיקראָוועלס דורך די ספּרעדער., שטעלן די שפּאָן אויף די פּקר מאַשין צו אַמפּלאַפיי, און לעסאָף שטעלן די שפּאָן אין די לייענער און נעמען אַ פאָטאָ צו לייענען די פלורעסאַנט סיגנאַל.די אָפּעראַציע איז לעפיערעך קאָמפּליצירט, און דער גאנצער פּראָצעס איז דורכגעקאָכט אין אַ פארמאכט שפּאָן, און די ריזיקירן פון קאַנטאַמאַניישאַן איז נידעריק.
5. JN MEDSYS קלעריטי שפּאָן דיגיטאַל פּקר
JN MEDSYS Clarity איז אַ לעפיערעך נייַ שפּאָן-טיפּ דיגיטאַל פּקר פּלאַטפאָרמע.זיין יקערדיק דיטעקשאַן פּראָצעס איז: לייגן די אָפּרוף לייזונג אין די אַפּלאַקייטער און פאַרשפּרייטן די אָפּרוף לייזונג יוואַנלי אויף 10,000 פּקר טובז פאַרפעסטיקט אין די פּקר רער דורך די אַפּלאַקייטער.אויף די מיקראָפּאָראָוס שפּאָן, די אָפּרוף לייזונג גייט אריין די שפּאָן דורך קאַפּאַלערי קאַמף, און די פּקר רער מיט די שפּאָן איז געשטעלט אויף די פּקר מאַשין פֿאַר אַמפּלאַפאַקיישאַן, און לעסאָף די שפּאָן איז שטעלן אין די לייענער צו לייענען די פלורעסאַנט סיגנאַל דורך גענומען אַ פאָטאָ.די אָפּעראַציע איז מער קאָמפּליצירט.די ריזיקירן פון קאַנטאַמאַניישאַן איז נידעריק.
די פּאַראַמעטערס פון יעדער דיגיטאַל פּקר פּלאַטפאָרמע זענען סאַמערייזד ווי גייט:
די אפשאצונג ינדיקאַטאָרס פון די דיגיטאַל פּקר פּלאַטפאָרמע זענען: די נומער פון שפּאַלטן וניץ, די נומער פון פלורעסאַנט טשאַנאַלז, די קאַמפּלעקסיטי פון אָפּעראַציע און די ריזיקירן פון קאַנטאַמאַניישאַן.אבער די מערסט וויכטיק זאַך איז די דיטעקשאַן אַקיעראַסי.איין וועג צו אָפּשאַצן דיגיטאַל פּקר פּלאַטפאָרמס איז צו נוצן קייפל דיגיטאַל פּקר פּלאַטפאָרמס צו באַשטעטיקן יעדער אנדערער, און אן אנדער וועג איז צו נוצן נאָרמאַל סאַבסטאַנסיז מיט פּינטלעך וואַלועס.
אַדוואַנטאַגעס פון דPCR
1.דערגרייכן אַבסאָלוט קוואַנטיפיקאַטיאָן
2.העכער סענסיטיוויטי און ספּעסיפיקאַטי
3.קענען דעטעקט נידעריק קאָפּיע סאַמפּאַלז
דיסאַדוואַנטידזשיז פון dPCR1. טייַער ויסריכט און רייידזשאַנץ 2. קאָמפּליצירט אָפּעראַציע און לאַנג דיטעקשאַן צייט 3. שמאָל דיטעקשאַן קייט
דערווייַל, די דריי דורות פון פּקר טעכנאָלאָגיע האָבן זייער אייגענע אַדוואַנטידזשיז און דיסאַדוואַנטידזשיז, און יעדער האט זייַן אייגענע אַפּלאַקיישאַן פעלדער, און עס איז נישט אַ שייכות אַז איין דור ריפּלייסיז די אנדערע.די קעסיידערדיק אנטוויקלונג פון טעכנאָלאָגיע האט ינדזשעקטיד נייַ ווייטאַלאַטי אין PCR טעכנאָלאָגיע, אַלאַוינג עס צו ופשליסן איין אַפּלאַקיישאַן ריכטונג נאָך דעם אנדערן, מאכן נוקלעיק זויער דיטעקשאַן מער באַקוועם און פּינטלעך.
מקור: ד"ר יואַן נעמט איר פֿאַר טעסטינג
רעקאַמענדיד פּראָדוקטן:
פּאָסטן צייט: נאוועמבער 18-2022
