פירן

לאנג ניט-קאָדינג רנאַ, lncRNA איז אַ ניט-קאָדינג רנאַ מיט אַ לענג פון מער ווי 200 נוקלעאָטידעס, בכלל צווישן 200-100000 נט.lncRNA רעגיאַלייץ דזשין אויסדרוק אין עפּיגענעטיק, טראַנסקריפּציע און פּאָסט-טראַנסקריפּשאַנאַל לעוועלס, און פּאַרטיסאַפּייץ אין X טשראָמאָסאָם סיילאַנסינג, גענאָמע ימפּרינטינג און טשראָמאַטין מאָדיפיקאַטיאָן, טראַנסקריפּציע אַקטאַוויישאַן, טראַנסקריפּציע ינטערפיראַנס, יאָדער אַריבערפירן, צעל ציקל רעגולירן, צעל דיפערענשייישאַן רעגולירן, און דאָזע פאַרגיטיקונג רעגולירן יפעקץ, און דאָזע פאַרגיטיקונג רעגולירן יפעקץ. יאָן פון מענטשלעך חולאתן, און זענען דערווייַל איינער פון די הייס ספּאַץ אין די פעלד פון ביאָמעדיסינע.

01  טייפּס און קעראַקטעריסטיקס פון LncRNA

lncRNA איז צעטיילט אין פילע טייפּס לויט די פאַרשידענע קוואלן פון זייַן פאָרמירונג, ווי געוויזן אין די פיגור אויבן.האט די פאלגענדע קעראַקטעריסטיקס:

1. לנקרנאַס זענען יוזשאַוואַלי מער, מיט דינאַמיש אויסדרוק און פאַרשידענע ספּלייינג מעטהאָדס בעשאַס דיפערענשייישאַן
2. קאַמפּערד מיט קאָדירונג גענעס, lncRNA יוזשאַוואַלי האט אַ נידעריקער אויסדרוק מדרגה
3. רובֿ לנקרנאַס האָבן קלאָר ווי דער טאָג צייט און ספּיישאַל אויסדרוק ספּעסיפיקאַטי אין דעם פּראָצעס פון געוועב דיפערענשייישאַן און אַנטוויקלונג
4. עס זענען כאַראַקטעריסטיש אויסדרוקן אין טומאָרס און אנדערע חולאתן
5. די סובסעללולאַר לאָוקיישאַנז פון לנקרנאַ זענען דייווערס
6. די סיקוואַנס איז נידעריק אין קאַנסערוויישאַן, אָבער די פֿונקציע האט אַ זיכער גראַד פון קאַנסערוויישאַן, אאז"ו ו.

02 אָפט געשטעלטע פֿראגן וועגן LncRNA פאַרקערט טראַנסקריפּציע

רעכט צו דער נידעריק אינהאַלט פון lncRNA אין סעלז, לאַנג לענג און הויך-מדרגה סטרוקטור, אַזאַ רנאַ אָפט האט קאָמפּלעקס סטראַקטשערז אַזאַ ווי סטעם לופּס אָדער האַירפּינס, און RT-qPCR איז פּראָנע צו פּראָבלעמס פון ניט געראָטן פאַרקערט טראַנסקריפּציע אָדער נידעריק עפעקטיווקייַט.

03 LncRNA פאַרקערט טראַנסקריפּציע לייזונג

אין די הויפט הערשן, דער פּראָצעס פון רנאַ ווירוסעס ניצן זייער אייגענע פאַרקערט טראַנסקריפּציע צו סינטאַסייז דנאַ ניצן רנאַ ווי אַ מוסטער איז גערופֿן פאַרקערט טראַנסקריפּציע.דער פּראָצעס פון ניצן רנאַ ווירוס פאַרקערט טראַנסקריפּציע צו סינטאַסייז cDNA מוסטער אין וויטראָ איז גערופֿן פאַרקערט טראַנסקריפּציע.די הויפּט יסודות אַרייַנגערעכנט אין די פאַרקערט טראַנסקריפּציע סיסטעם: רנאַ מוסטער, פאַרקערט טראַנסקריפּציע, אָנפאַנגערס און אנדערע קאַמפּאָונאַנץ.

1.רנאַ מוסטער

די השפּעה פון רנאַ מוסטער אויף פאַרקערט טראַנסקריפּציע איז שפיגלט אין זייַן סטרוקטור, ריינקייַט און אָרנטלעכקייַט.די העכער די ריינקייַט און אָרנטלעכקייַט פון די יקסטראַקטיד רנאַ, די העכער די עפעקטיווקייַט פון פאַרקערט טראַנסקריפּציע און די מער פּינטלעך די סאַבסאַקוואַנט קוואַנטיטאַטיווע רעזולטאַטן.די רנאַ פּיוראַפייד דורך קאַמאַנלי געניצט רנאַ יקסטראַקשאַן רייידזשאַנץ אָפט כּולל רעזאַדוז פון אַלקאָהאָל און גואַנידינע סאָלץ, וואָס האָבן אַ שטאַרק ינכיבאַטאָרי ווירקונג אויף רובֿ פאַרקערט טראַנסקריפּציע.

2. פאַרקערט טראַנסקריפּציע

פאַרקערט טראַנסקריפּציע האט אַ שליסל השפּעה אין די גאנצע פאַרקערט טראַנסקריפּציע סיסטעם.די פּאַסיק טעמפּעראַטור פֿאַר די פאַרקערט טראַנסקריפּציע געניצט אין רובֿ לאַבאָראַטאָריעס איז בכלל 42 °C.אין פאַקט, די עפן פון די הויך-מדרגה רנאַ סטרוקטור ריקווייערז אַ העכער טעמפּעראַטור, און די רעקווירעמענץ פֿאַר די פאַרקערט טראַנסקריפּציע זענען העכער.

3.אָנפאַנגער

פאַרקערט טראַנסקריפּציע פּרימערז אַרייַננעמען דזשין-ספּעציפיש פּרימערז, טראַפ - פּרימערז און Oligo dT פּרימערז.רובֿ לנקרנאַס טאָן ניט אַנטהאַלטן פּאָליאַ עקן, און עס איז וויכטיק צו ריכטיק גלייַכן די ראַנדאָם פּרימערז מיט Oligo dT.

4.אנדערע קאַמפּאָונאַנץ

אין מיינונג פון די פאַקט אַז רנאַ איז דער הויפּט גרינג צו דיגרייד, די הקדמה פון קאַמפּאָונאַנץ אין די פאַרקערט טראַנסקריפּציע סיסטעם קענען זיין מינאַמייזד, וואָס קענען יפעקטיוולי פאַרמייַדן די פּאָזיציע פון ​​רנאַסע און ענשור די גלאַט פּראָגרעס פון פאַרקערט טראַנסקריפּציע.

Foregeneבאקומען פון רנאַ מוסטער, פאַרקערט טראַנסקריפּציע צו qPCR

באַגלייטן דיין lncRNA דיטעקשאַן

כייַע גאַנץ רנאַ Iסאָולאַטיאָןקיט (מיט גדנאַ באַזייַטיקונג זייַל)

צעל גאַנץ RNA Iסאָולאַטיאָןקיט (מיט גדנאַ באַזייַטיקונג זייַל)

Lnc-RT HeroTM I (מיט גדנאַסע) (סופּער פּרעמיקס פֿאַר ערשטער-שנירל קדנאַ סינטעז פֿון LncRNA)

פאַקטיש צייט PCR EasyTM-SYBR גרין I

Aאַדוואַנטאַגעס ofRNA עקסטראַקטיאָן:

די קיט ניצט די דריט-דור רנאַ יקסטראַקשאַן טעכנאָלאָגיע, ניט דאַרפֿן צו נוצן דנאַסע.

11 מינוט פון 96, 24, 12 און 6-געזונט טעלער געבילדעטער סעלז, הויך-עפעקטיווקייַט יקסטראַקשאַן פון גדנאַ-פריי, הויך-ריינקייַט, הויך-קוואַליטעט גאַנץ צעל רנאַ.

אַדוואַנטאַגעס פון lncRNA פאַרקערט טראַנסקריפּציע:

א פאַרקערט טראַנסקריפּציע סיסטעם ספּעשאַלי דעוועלאָפּעד פֿאַר LncRNA צו געשווינד באַזייַטיקן גענאָמיק דנאַ קאַנטאַמאַניישאַן.

די פאַרקערט טראַנסקריפּציע סיסטעם האט הויך טערמאַל פעסטקייַט און נאָך האט גוט פאַרקערט טראַנסקריפּציע פאָרשטעלונג ביי 50 ° C.

טעמפּלאַטעס מיט הויך גק אינהאַלט און קאָמפּלעקס צווייטיק סטרוקטור קענען זיין ריווערסט מיט הויך עפעקטיווקייַט.

אַדוואַנטאַגעסof qPCR:

הייס אָנהייב Foregene Taq Polymerase האט העכער אַמפּלאַפאַקיישאַן עפעקטיווקייַט, העכער אַמפּלאַפאַקיישאַן סענסיטיוויטי און העכער אַמפּלאַפאַקיישאַן ספּעסיפיקאַטי

די אָפּטימיזעד רעאַל פּקר יזי מיקס מאכט SYBR גרין איך האָבן העכער דיטעקשאַן סענסיטיוויטי, און די פלואָרעססענסע ינטענסיטי איז 3-5 מאל אַז פון ענלעך פּראָדוקטן, וואָס קענען טרעפן די באדערפענישן פון פאַרשידענע טייפּס פון פלואָרעססענסע קוואַנטיטאַטיווע יקספּעראַמאַנץ.