• facebook
  • לינקעדין
  • יאָוטובע

1. דעטעקט די אַבזאָרבאַנס פון רנאַ לייזונג

אַבזאָרבאַנס ביי 280, 320, 230 און 260 נם רעפּראַזענץ די וואַלועס פון נוקלעיק זויער, הינטערגרונט (סאַלושאַן טורבידאַטי), זאַלץ קאַנסאַנטריישאַן און אָרגאַניק ענין אַזאַ ווי פּראָטעין ריספּעקטיוולי.אין אַלגעמיין נאָר קוק אין OD260/OD280 (פאַרהעלטעניש, ר).ווען 1.8 ~ 2.0, מיר טראַכטן אַז די קאַנטאַמאַניישאַן פון פּראָטעין אָדער אנדערע אָרגאַניק ענין אין רנאַ קענען זיין טאָלעראַטעד, אָבער עס זאָל זיין באמערקט אַז ווען טריס איז געניצט ווי די באַפער צו דעטעקט די אַבזאָרבאַנס, די ר ווערט קען זיין גרעסער ווי 2 (בכלל עס זאָל זיין <2.2).ווען ר <1.8, די פאַרפּעסטיקונג פון פּראָטעין אָדער אנדערע אָרגאַניק ענין אין די לייזונג איז מער קלאָר ווי דער טאָג, און דער גורל פון די רנאַ קענען זיין באשלאסן לויט די באדערפענישן.ווען ר>2.2, עס מיטל אַז רנאַ איז כיידראַלייזד אין איין נוקלעיק זויער.
 
2.עלעקטראָפאָרעטיק מוסטער פון רנאַ
אין אַלגעמיין, דינאַטורינג געל איז געניצט פֿאַר רנאַ עלעקטראָפאָרעסיס, אָבער אויב עס איז בלויז פֿאַר דיטעקטינג די קוואַליטעט פון רנאַ, דינאַטורינג געל איז ניט נייטיק, און פּראָסט אַגאַראָסע געל קענען זיין געוויינט.דער ציל פון עלעקטראָפאָרעסיס איז צו דעטעקט די אָרנטלעכקייַט פון 28S און 18S באַנדס און זייער פאַרהעלטעניש, אָדער די אָרנטלעכקייַט פון מרנאַ שמיר.אין אַלגעמיין, אויב די 28S און 18S באַנדס זענען העל, קלאָר און שאַרף (ריפערינג צו די עדזשאַז פון די באַנדס זענען קלאָר), און די ברייטנאַס פון 28S איז מער ווי צוויי מאָל אַז פון די 18S באַנד, מיר באַטראַכטן די קוואַליטעט פון די רנאַ צו זיין גוט.
די אויבן זענען די צוויי מעטהאָדס וואָס מיר אָפט נוצן, אָבער קיין פון די צוויי מעטהאָדס קענען קלאר זאָגן אונדז צי עס איז ריזידזשואַל רנאַסע אין די רנאַ לייזונג.אויב עס איז אַ זייער קליין סומע פון ​​רנאַסע אין די לייזונג, עס איז שווער פֿאַר אונדז צו דעטעקט עס מיט די אויבן אופֿן, אָבער רובֿ פון די סאַבסאַקוואַנט ענזימאַטיק ריאַקשאַנז זענען דורכגעקאָכט אין העכער 37 דיגריז און פֿאַר אַ לאַנג צייַט.אין דעם וועג, אויב עס איז אַ זייער קליין סומע פון ​​רנאַסע אין די רנאַ לייזונג, עס וועט זיין אַ זייער פּאַסיק סוויווע און צייט צו שפּילן זייער ראָלע אין די סאַבסאַקוואַנט יקספּעראַמאַנץ, און דאָך דער עקספּערימענט וועט זיין קאַלט אין דעם צייט.ונטער מיר באַקענען אַ אופֿן וואָס קענען באַשטעטיקן צי עס איז ריזידזשואַל רנאַסע אין די רנאַ לייזונג.
 
3. היץ פּרעזערוויישאַן פּרובירן
לויט דער מוסטער קאַנסאַנטריישאַן, ציען צוויי 1000 נג רנאַ פון די רנאַ לייזונג און לייגן עס צו אַ 0.5 מל סענטריפודזש רער, און סאַפּלאַמענט עס מיט אַ pH 7.0 טריס באַפער צו אַ גאַנץ באַנד פון 10 ul, און דעמאָלט פּלאָמבע די היטל פון די רער.שטעלן איינער פון זיי אין אַ קעסיידערדיק טעמפּעראַטור וואַסער וואַנע בייַ 70 ° C און האַלטן עס וואַרעם פֿאַר 1 שעה.די אנדערע טייל איז סטאָרד אין אַ -20 ° C פרידזשידער פֿאַר 1 שעה.ווען די צייט איז אַרויף, אַראָפּנעמען די צוויי סאַמפּאַלז פֿאַר עלעקטראָפאָרעסיס.נאָך די עלעקטראָפאָרעסיס איז געענדיקט, פאַרגלייַכן די ילעקטראָופאָרעטיק באַנדס פון די צוויי.אויב די באַנדס פון די צוויי זענען קאָנסיסטענט אָדער האָבן קיין באַטייַטיק חילוק (פון קורס, זייער באַנדס אויך טרעפן די באדינגונגען אין אופֿן 2), עס מיטל אַז עס איז קיין ריזידזשואַל רנאַסע קאַנטאַמאַניישאַן אין די רנאַ לייזונג, און די קוואַליטעט פון די רנאַ איז זייער גוט.אויף די פאַרקערט, אויב דער מוסטער ינגקיובייטיד ביי 70 ° C ווייזט קלאָר ווי דער טאָג דערנידעריקונג, עס ינדיקייץ אַז עס איז רנאַסע קאַנטאַמאַניישאַן אין די רנאַ לייזונג.
 
2 עקספּערימענטאַל מעטהאָדס און טעקניקס פֿאַר רנאַ יקסטראַקשאַן
די פראבלעמען וואָס מיר אָפט טרעפן ווען יקסטראַקטינג רנאַ זענען: (1) רנאַ טראָגן איז נידעריק;(2) רנאַ האט ערנסט זאַלץ פאַרפּעסטיקונג;(3) רנאַ האט ערנסט אָרגאַניק סאַלוואַנט פאַרפּעסטיקונג;(4) מוסטער דערנידעריקונג און אנדערע פּראָבלעמס
 
1. קאַמאַנלי געניצט גאַנץ רנאַ יקסטראַקשאַן רייידזשאַנץ
די גואַנידינע יסאָטהיאָסיאַנאַטע אופֿן און די טריזאָל אופֿן זענען די מערסט קאַמאַנלי געניצט מעטהאָדס פֿאַר די יקסטראַקשאַן פון גאַנץ רנאַ פון כייַע געוועבן און כייַע סעלז.עס איז ספּעציעל פּאַסיק פֿאַר קליין סאַמפּאַלז און געוועבן וואָס זענען ספּעציעל שווער צו עקסטראַקט, אַזאַ ווי יקסטראַקשאַן פון גאַנץ רנאַ פון קיניגל הויט און כייַע קאַנעקטיוו געוועב;אין אַדישאַן, טריזאָל, ווי אַ גענעראַל-ציל לייסיס רייידזשאַנט, קענען אויך זיין געניצט פֿאַר די יקסטראַקשאַן פון פאַבריק געוועבן, באַקטיריאַ, פאַנדזשיי און אנדערע געוועבן.פֿאַר פאַבריק געוועבן מיט פּאַליסאַקעריידז און פּאָליפענאָלס, אַזאַ ווי קאַמעלליאַ אָלעיפעראַ, טיי בלעטער, רייפּסיד, אאז"ו ו, די CTAB אופֿן קענען אויך זיין געניצט צו עקסטראַקט גאַנץ רנאַ.

ווי אַ קאַנווענשאַנאַל אופֿן, די טאָפּל-זייַל אופֿן איז אויך זייער פאָלקס רעכט צו דער נאָרמאַל טעמפּעראַטור אָפּעראַציע, ניט דאַרפֿן צו לייגן רנאַסע און זיכערקייַט - קיין טשלאָראָפאָרם, פענאָלס און אנדערע אָרגאַניק רייידזשאַנץ פֿאַר יקסטראַקשאַן.(רעקאַמענדיד פּראָדוקטן )

1
2

2. יקסטראַקשאַן פון גאַנץ רנאַ פון כייַע געוועבן
 
(1) פּרוּווט צו קלייַבן פריש געוועב, אויב עס איז נישט פריש (פּרעפעראַבלי אין דרייַ חדשים - 80 ℃ פרידזשידער אָדער פאַרפרוירן אין פליסיק ניטראָגען. ווען קאַטינג געוועב, טאָן ניט שנייַדן גלייַך אין צימער טעמפּעראַטור, זיין זיכער צו שטעלן עס אויף די אייז קעסטל, פּרובירן צו ויסמיידן ריפּיטיד ייַז קאַלט און טאָינג.
(2) ניצן ריין שער און פּינצעט צו שנייַדן אַ קליין שטיק פון געוועב, פּרובירן צו שנייַדן די הויפט טייל פון די געוועב ווען קאַטינג די מוסטער, אָדער ערשטער שנייַדן די גרויס שטיק פון געוועב פון די מיטל, און דעמאָלט שנייַדן די מוסטער אין די פריש ינסיזשאַן שטעלע.די אַוועקגענומען געוועב זאָל זיין גאָר שרעדיד, שטעלן די שרעדיד געוועב אין אַן עפּ רער אָן רנאַסע, לייגן די ליסאַטע, די שרעדיד געוועב זאָל זיין גאָר יקספּאָוזד צו די ליסאַטע, און צוגרייטן פֿאַר כאָומאַדזשאַנאַזיישאַן.

(3) פֿאַר נאָרמאַל געוועבן, אויסקלייַבן מונג בעבל-סייזד געוועבן (30-60 מג) פֿאַר כאָומאַדזשאַזיישאַן.אויב די געוועבן אַנטהאַלטן אַ גרויס סומע פון ​​​​פּראָטעין, פעט אָדער געדיכט פייבראַס געוועבן אַזאַ ווי לעבער, אַפּראָופּרייטלי פאַרגרעסערן אָדער פאַרמינערן די סומע פון ​​שנייַדן געוועבן (אַפּשאַנאַל) קלייַבן 10-20 מג.
(4) אויב פיש מוסקל, שרימפּ פלייש, דזשעלליפיש און אנדערע געוועבן מיט הויך וואַסער צופרידן זענען יקסטראַקטיד, די מוסטער באַנד זאָל זיין אַפּראָופּרייטלי געוואקסן (רעקאַמענדיד 100-200 מג).
(5) אויב די באדינגונגען דערלויבן, די כייַע געוועב קענען זיין יקסטראַקטיד גלייַך נאָך כאָומאַדזשאַנייזד מיט אַ הויך-דורכפאָר געוועב האָמאָגעניזער, אויב עס איז ניט אַזאַ ויסריכט.
(6) די רנאַ באקומען נאָך די לעצט יקסטראַקשאַן מוזן זיין געשטעלט אויף די אייז קעסטל מיד צו רעדוצירן די דערנידעריקונג פון רנאַ.

3. אַנימאַל צעל רנאַ יקסטראַקשאַן

(1) סאַספּענשאַן סעלז: סענטריפודזש גלייך און אַוועקוואַרפן די מיטל, וואַשן מיט סטערילע פּבס פֿאַר 1-2 מאל, דעמאָלט ופהענגען מיט אַ צונעמען סומע פון ​​פּבס, און דעריבער לייגן ליסאַטע פֿאַר ליסיס.דו זאלסט נישט לייגן די ליסאַטע גלייַך צו די פּרעסיפּיטאַטעד סעלז נאָך גאָר אַוועקוואַרפן די פליסיק.דאָס וועט פאַרשאַפן די היסטאָנע פּעקל באפרייט נאָך די ליסעד סעלז אויף די ויסווייניקסט שיכטע צו אַדכיר צו די אַרויס פון די פּרעסיפּיטאַטעד סעלז, דערמיט לימאַטינג די קאָנטאַקט פון די סעלז ין די פּעללעט מיט די ליסאַטע., ריזאַלטינג אין דערענדיקט צעל ליסיס און רידוסט רנאַ טראָגן.

(2) סעלז וואָס זענען האַלב-אַדהעראַנט אָדער נישט טייטלי אַדכיראַנט: נאָך אַוועקוואַרפן די מיטל, וואַשן מיט PBS פֿאַר 1-2 מאל, דאַן גלייך אַרייַנציען אַ צונעמען סומע פון ​​​​פּבס און בלאָזן די קולטור שיסל מיט אַ פּיפּעטטע אָדער ביקס צו בלאָזן אַוועק די סעלז און אַריבערפירן זיי צו רנאַ-פריי סעלז.לייג די ליסאַטע צו די EP רער פון די ענזיים פֿאַר יקסטראַקשאַן.

(3) אַדכיראַנט סעלז: דאַרפֿן צו זיין דיידזשעסטיד מיט טריפּסין ערשטער, דעמאָלט געזאמלט אין רנאַסע-פריי עפּ טובז, סענטריפוגדעד צו באַזייַטיקן די סופּערנאַטאַנט, געוואשן 1-2 מאל מיט פּבס צו באַזייַטיקן וידעפדיק טריפּסין, און ריסאַספּאַנדיד מיט אַ צונעמען סומע פון ​​​​פּבס און גיינ ווייַטער צו די יקסטראַקשאַן שריט.

4. פּלאַנט רנאַ יקסטראַקשאַן

פּלאַנט געוועבן זענען רייַך אין פענאָליק קאַמפּאַונדז, אָדער רייַך אין פּאַליסאַקעריידז, אָדער אַנטהאַלטן עטלעכע אַניידענטאַפייד צווייטיק מעטאַבאָליטעס, אָדער האָבן אַ הויך טעטיקייט פון רנאַסע.די סאַבסטאַנסיז זענען טייטלי קאַמביינד מיט רנאַ נאָך צעל ליסיס צו פאָרעם ינסאַליאַבאַל קאַמפּלעקסאַז אָדער קאַלוידאַל פּרעסיפּיטאַטעס, וואָס זענען שווער צו באַזייַטיקן.דעריבער, ווען מיר עקסטראַקט פאַבריק געוועב, מיר דאַרפֿן צו קלייַבן אַ קיט פֿאַר געוויקסן.די ליסאַטע אין די קיט קענען יפעקטיוולי סאָלווע די פּראָבלעמס פון גרינג אַקסאַדיישאַן פון פּאָליפענאָלס און צעשיידונג פון פּאַליסאַקערייד קאַמפּאַונדז און נוקלעיק אַסאַדז.

(פֿאַר פּאַליסאַקערייד פּאָליפענאָל פאַבריק רנאַ יקסטראַקשאַן, רעקאַמענדיד פּראָדוקטן:

(1) די שאָלעכץ, פּאַפּ, זאמען, בלעטער, אאז"ו ו פון די פאַבריק זאָל זיין גאָר ערד אין אַ מאָרטער.בעשאַס די גרינדינג פּראָצעס, פליסיק ניטראָגען זאָל זיין ריפּלענישט אין צייט צו ויסמיידן מעלטינג די מוסטער.דער ערד מוסטער זאָל זיין געשווינד מוסיף צו די ליסאַטע און אויפגעטרייסלט צו ויסמיידן רנאַ דערנידעריקונג.

(2) פֿאַר פיברע-רייַך סאַמפּאַלז אַזאַ ווי רייַז און ווייץ בלעטער, די סומע פון ​​יקסטראַקשאַן זאָל זיין אַפּראָופּרייטלי רידוסט, אַנדערש די געוועב גרינדינג און ליסיס וועט נישט זיין גאַנץ, ריזאַלטינג אין אַ נידעריק טראָגן פון יקסטראַקטיד רנאַ.

(3) פֿאַר פאַבריק געוועבן מיט הויך וואַסער אינהאַלט, אַזאַ ווי מילגרוים פרוכט, קאַווענע פרוכט, פערשקע פרוכט, אאז"ו ו, די מוסטער גרייס זאָל זיין אַפּראָופּרייטלי געוואקסן (100-200 מג איז אַפּשאַנאַל).

(4) פּלאַנט געוועבן, אַזאַ ווי פאַבריק בלעטער, רייזאָומז, שווער פירות און אנדערע מאַטעריאַלס זענען בכלל רעקאַמענדיד צו נוצן פליסיק ניטראָגען צו ונ דורך מאָרטער די ינגרידיאַנץ אין אַ מאָרטער, און דעמאָלט גיינ ווייַטער צו די יקסטראַקשאַן שריט.קאַנווענשאַנאַל געוועב כאָומאַדזשאַניזערז קען נישט זיין עפעקטיוו אין כאָומאַדזשאַנייזינג פאַבריק געוועבן, און זענען בכלל נישט רעקאַמענדיד.

5. פּריקאָשאַנז פֿאַר רנאַ יקסטראַקשאַן

(1) געוועב סאַמפּאַלז זאָל זיין ווי פריש ווי מעגלעך צו ויסמיידן ריפּיטיד ייַז קאַלט און טאָינג.

(2) די געוועב זאָל זיין גאָר ערד בעשאַס יקסטראַקשאַן, און די סומע פון ​​געוועב זאָל נישט זיין צו קליין, לאָזן אַליין צו פיל.

(3) גענוג ינגקיוביישאַן צייט זאָל זיין געגעבן נאָך אַדינג די ליסאַטע צו גאָר ליס די מוסטער.

(4) ווען ניצן די טריזאָל אופֿן פֿאַר יקסטראַקשאַן, דער פּרינציפּ פון אַבזאָרבינג די סופּערנאַטאַנט נאָך סטראַטיפיקאַטיאָן איז "בילכער צו ייַנאָטעמען ווייניקער ווי ייַנאָטעמען מער", און מוזן נישט עקסטראַקט צו די מיטל שיכטע, אַנדערש עס וועט פאַרשאַפן ערנסט גענאָמיק דנאַ קאַנטאַמאַניישאַן.

(5) ווען וואַשינג, די וואַשינג פליסיק זאָל גאָר ינפילטרייט אַרום די רער וואַנט צו ענשור אַ גרונטיק וואַשינג.

(6) פֿאַר די זייַל יקסטראַקשאַן אופֿן, אין אַדישאַן צו דיטאַטשינג די זייַל נאָך וואַשינג, די אַדסאָרפּטיאָן זייַל זאָל אויך זיין געשטעלט אין אַ הינטער-ריין באַנק און בלאָון פֿאַר 5-10 מינוט צו גאָר יוואַפּערייט די אָרגאַניק סאַלוואַנט צו דריינאַס.

(7) אין די לעצטע ילושאַן פון די זייַל אופֿן, נאָך אַדינג דעפּק וואַסער, עס זאָל זיין ינגקיובייטיד פֿאַר 3-5 מינוט, אָדער די דעפּק וואַסער זאָל זיין העאַטעד צו 60 ° C אין שטייַגן צו פאַרגרעסערן די ילושאַן טראָגן.אין דעם טראדיציאנעלן טריזאָל קלעאַוואַגע און יסאָפּראָפּאַנאָל אָפּזאַץ אופֿן, די לעצט רנאַ איז צעלאָזן אין דעפּק וואַסער, אַזוי אַ צונעמען צייט זאָל זיין געגעבן פֿאַר דיסאַלושאַן, און די דנאָ פון די סענטריפודזש רער זאָל זיין קאַנטיניואַסלי בלאָון מיט אַ פּיפּעטטע שפּיץ.

3 טדריי סיבות און סאַלושאַנז פֿאַר נידעריק רנאַ קאַנסאַנטריישאַן / נעבעך קוואַליטעט
 
1. די טראָגן איז אויך נידעריק
די יקסטראַקטיד מוסטער איז צו נידעריק, די גאַנץ סומע איז ניט גענוגיק, אָדער די יקסטראַקטיד מוסטער איז צו פיל און די ליסיס איז נישט גאַנץ;די געוועב אָדער סעלז פון צונעמען קוואַליטעט זאָל זיין געניצט פֿאַר יקסטראַקשאַן, די פאַר-באַהאַנדלונג פון די מוסטער מוזן זיין דורכגעקאָכט געזונט, און די ליסיס זאָל זיין גענוג.
 
2. גענאָמע רעזאַדוז
ווען יקסטראַקטינג דורך טריזאָל אופֿן, ווען די סופּערנאַטאַנט איז סאַקט אין די מיטל שיכטע נאָך לייערינג, ערנסט גענאָמע קאַנטאַמאַניישאַן וועט זיין געפֿירט;עקסטרע זאָרג זאָל זיין גענומען ווען לייערינג צו ויסמיידן סאַקינג אין די מיטל שיכטע.אויב דער זייַל אופֿן איז געניצט פֿאַר יקסטראַקשאַן, אַ קיט מיט DNase I קענען זיין אויסגעקליבן פֿאַר יקסטראַקשאַן.די נוקלעיק זויער אַבזאָרבד אויף די מעמבראַנע איז גלייַך דיידזשעסטיד מיט דנאַסע איך, וואָס קענען זייער רעדוצירן דנאַ רעזאַדוז.
 
3. רנאַ דערנידעריקונג
עס קען זיין די דערנידעריקונג פון די יקסטראַקטיד מוסטער זיך, אָדער די דערנידעריקונג געפֿירט בעשאַס די יקסטראַקשאַן פּראָצעס;ווי ווייַט ווי מעגלעך, פריש סאַמפּאַלז זאָל זיין געוויינט פֿאַר רנאַ יקסטראַקשאַן, און די געזאמלט סאַמפּאַלז זאָל זיין סטאָרד אין פליסיק ניטראָגען אָדער -80 ° C פרידזשידער אין צייט, און ריפּיטיד ייַז קאַלט און טאָינג זאָל זיין אַוווידאַד.רנאַסע / דנאַסע פריי עצות, סענטריפודזש טובז און אנדערע מאַטעריאַלס זאָל זיין געוויינט אין די רנאַ יקסטראַקשאַן פּראָצעס.די יקסטראַקשאַן פּראָצעס זאָל זיין ווי שנעל ווי מעגלעך.די יקסטראַקטיד רנאַ זאָל זיין געשטעלט אויף אַן אייז קעסטל און סטאָרד אין -80 אין צייט.אויב די יקסטראַקטיד רנאַ דאַרף זיין דיטעקטאַד דורך געל עלעקטראָפאָרעסיס, עלעקטראָפאָרעסיס זאָל זיין דורכגעקאָכט מיד נאָך יקסטראַקשאַן, און די עלעקטראָפאָרעסיס באַפער זאָל זיין ריפּלייסט מיט אַ ניי צוגעגרייט איינער.
 
4. זאַלץ און אָרגאַניק סאַלוואַנט רעזאַדוז
די יקסטראַקשאַן ריידזשאַנץ אַנטהאַלטן פענאָל און גואַנידינע סאָלץ, און די וואַשינג לייזונג כּולל עטאַנאָל.בעשאַס די יקסטראַקשאַן פּראָצעס, די ליסאַטע איז נישט גאָר אַבזאָרבד און אַוועקגענומען, און די וואַשינג לייזונג איז נישט גאָר דאַר.רעזידענטשאַל סאָלץ און אָרגאַניק סאָלוואַנץ זענען שעדלעך צו סאַבסאַקוואַנט פאַרקערט טראַנסקריפּציע און פּקר.פאַרשידענע גראַדעס פון ינאַבישאַן, אַזוי די געוועב ליסאַטע זאָל זיין גאָר אַוועקגענומען בעשאַס די יקסטראַקשאַן פּראָצעס, און די וואַשינג זאָל זיין גענוג אַזוי אַז די אַרומיק ווענט פון די רער קענען זיין געוואשן.אין דערצו, די רער איז עמפּטיד און בלאָון איז אַ נייטיק שריט, וואָס וועט ווייַטער רעדוצירן די רעזאַדו פון אָרגאַניק ענין.
 
פֿאַר מער אינפֿאָרמאַציע וועגן רנאַ יקסטראַקשאַן, ביטע נאָכפאָלגן אונדזער וועבזייטל:
www.foreivd.com פֿאַר מער אינפֿאָרמאַציע.

7

פּאָסטן צייט: דעצעמבער 01-2022